细胞衰老与细胞死亡.ppt

2002年10月7日英国人悉尼·布雷诺尔、美国人罗伯特·霍维茨和英国人约翰·苏尔斯顿，因在细胞程序性死亡方面的研究获诺贝尔诺贝尔生理与医学奖。 Sydny Brenner 细胞凋亡时DNA的特征性降解 失巢凋亡 ——特殊的细胞程序性死亡 因细胞与细胞外基质和其他细胞脱离接触而诱发； 正常上皮细胞或不具转移性的实体瘤细胞从原位脱落进入血流引发； 意义在于防止脱落细胞种植并生长于其他不适宜的地方； 转移的恶性肿瘤细胞具极强的抗失巢凋亡特性。 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 非凋亡性细胞程序性死亡 ——无典型细胞凋亡特征 卵巢黄体细胞 卵巢卵泡闭锁 烟草幼蝇蛾幼虫体节肌细胞 秀丽隐杆线虫雄性个体连接细胞 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞死亡的方式 细胞死亡的检测 细胞凋亡的调节 细胞凋亡的意义 细胞凋亡 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 鉴定细胞死亡最直接、最快捷的方法是活性染色法。常用的有台盘蓝和中性红。因细胞死亡后，膜结构变化，只有死细胞才能被台盘蓝染色，活细胞不被染色。应用中性红染色时，活细胞染色而死细胞无色，借以鉴别细胞。 离体细胞的活性染料拒染观察 卵巢皮质薄片经胶原酶消化后分离卵泡，后者经cal-AM/EH-I染色后置倒置荧光显微镜下观察，结果显示健康卵泡为绿色(B)，基本健康卵泡为红绿相间(C, 存活卵母细胞为绿色，部分死亡颗粒细胞显示红色)，死亡卵泡整体呈现红色(D)，图E中箭头显示一死亡卵泡。 from Martinez-Madrid, et al, 2004 胶原酶分离卵巢卵泡的活性检测 细胞死亡的方式 细胞死亡的检测 细胞凋亡的调节 细胞凋亡的意义 细胞凋亡 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞死亡的调节 ——细胞凋亡的调节 秀丽广杆线虫 哺乳动物 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞凋亡的调节 ——秀丽广杆线虫 凋亡决定基因 吞噬相关基因 核酸酶基因 细胞类型基因 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞凋亡的调节 ——秀丽广杆线虫 凋亡决定基因 ——生存还是死亡 促凋亡基因：ced-3、ced-4； 抗凋亡基因：ced-9； 上游基因(ced-9)，下游基因(ced-3、ced-4)； ced-3可独立发挥作用，ced-4在胚胎发生时表达，依赖于ced-3。 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 吞噬相关基因 ——清除凋亡小体 凋亡细胞的吞噬和清除； 种类：ced-1/2/5/6/7/8/10。 细胞凋亡的调节 ——秀丽广杆线虫 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 核酸酶基因 ——DNA粉碎机 nuc-1基因(编码Ca2+/Mg2+依赖性核酸内切酶)； 控制对染色质DNA随机降解。 细胞凋亡的调节 ——秀丽广杆线虫 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞类型基因 ——天使的选择 ces-1/ces-2：线虫细胞存活调控基因； eg1-1/her-1：调节神经元和生殖系统体细胞的凋亡。 细胞凋亡的调节 ——秀丽广杆线虫 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞凋亡的调节 ——哺乳动物 Bcl-2家族 ICE/Caspase家族 细胞凋亡蛋白酶激活因子 其他与细胞凋亡有关的基因 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 细胞凋亡的调节 ——哺乳动物 最初是在B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/Leukemia-2，bcl-2)中发现； Bcl-2蛋白存在于多种细胞内膜上，但主要定位于线粒体外膜； 多个成员，具有共同的Bcl-2同源结构域(BH)，通常还有一C-端跨膜结构域； Bcl-2家族根据结构和功能分为两类：?抗凋亡的如Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w和Mcl-1等；?促凋亡的如Bcl-xs、Bax、Bak、Bad、Bid以及Bim等。 Bcl-2基因家族 ——与线虫Ced-9同源 细胞衰老与细胞凋亡 细胞凋亡 Bcl-2家族成员及功能 Bcl-2蛋白存在于线粒体膜、内质网膜以及外核膜上，但主要定位于线粒体外膜，它拮抗促凋亡蛋白的功能。大多数促凋亡蛋白定位于细胞质，一旦细胞受到凋亡因子的诱导，它们可以向线粒体转位，通过寡聚化在线粒体外膜形成跨膜通道，或者开启线粒体内膜通道，导致线粒体中cytc释放，激活切冬酶，导致细胞凋亡。胞质中的促凋亡蛋白可通过不同的方式激活，包括去磷酸化，如Bad；被caspase加工为活性分子，如Bid；从结合蛋白上释放出来，如Bim是与微管蛋白结合在一起的。 细胞凋亡的调节 ——哺乳动物 一种半胱氨酸特异的天冬氨酸水解酶(cysteine aspartate-specific protease)； 同一基因编码，前体被切割后产生两个大小两亚基，形成异四聚体； 分为两类(ICE/CED)、三种(ICE/凋亡启动者/凋亡执行者)； 细胞中存