细胞培养5.ppt

* 动物细胞培养 2012年10月 指导教师：张坤、王攀、王筱冰、 黄亚亚、王海萍、李彩凤、 阎晗、杨爽、薛沁 办公室：3329 什么是细胞培养？what 为什么要进行细胞培养？why 如何进行细胞培养？how 什么是细胞培养？ 在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术。 培养简史 最早证明动物组织培养为一种有用的实验性技术是在1907年美国动物学家Ross Granville Harrison。他设计出一种很有效的方法，即哈里森悬滴培养法 ,他首次成功地在体外培养基(凝结的淋巴)中培养了神经元，从而排除了所有其他活组织参与的可能性。 哈里森悬滴培养法 1912年，Carrel采用更换培养基和传代的方法解决了组织块长期存活的问题； 1943年，Earle培养出能长期培养的L细胞系（动物小鼠）； 1951年，Gey成功建立Hela细胞系（人）； 1955年，Earle研制成功人工合成的培养基； 20世纪70年代Sato等人发展了无血清培养； 我们国家的组织培养工作是从20世纪50年代开始。 组织培养技术已经成为生物学和医学研究中普遍应用的手段。 细胞培养的优缺点 优点： 1、培养环境易于控制； 2、多次传代培养形成的细胞系细胞特征基本相同，对外界影响的反应更加一致； 3、节省试剂，减少动物的使用； 缺点： 1、 要求严格，对操作者的知识水平与技术由要求； 2、培养量与成本； 3、遗传不稳定，表型不稳定； 体外培养细胞的特征 一、形态学特征 根据细胞的生长是否需要贴附在支持物上，可将其分为贴附型和悬浮型两大类。 1．贴附型 贴附型细胞又称锚定依赖性细胞(anchorage dependent cell)。贴附型细胞只能附着于底物(支持物)表面生长，当细胞贴附在支持物上之后，易失去它们在体内时原有的特征，细胞分化现象常变得不显著。在光学显微镜下可将体外培养的贴附型细胞从形态上分为成纤维型细胞、上皮型细胞、游走型细胞、多形型细胞(见图1)。 图1. 几种贴附型细胞 2．悬浮型 有的细胞在培养时不贴在支持物上，而是悬浮在液体中，呈悬浮状态生长，如某些肿瘤细胞和血液白细胞等。细胞悬浮生长时胞体呈圆球形。细胞悬浮培养的优点是细胞悬浮在培养液中生长，生存空间大，生长时间长，能繁殖出大量细胞，便于做细胞代谢等方面的研究。 二、遗传学特征 细胞遗传学特征是检测培养细胞的极重要的指标，是了解遗传性状的最基本和必要的技术，通过核型分析可以判断细胞是否是二倍体，是否发生了遗传变异以及恶化等。 1．核型变化 在组织培养中呈二倍体核型的细胞群体称二倍体细胞(diploid cell)。初代正常培养细胞多呈二倍体，通过传代培养后，在培养条件良好的情况下，二倍体细胞可能长期保持二倍体状态。但体外细胞培养环境的稳定性是相对的，细胞经过长期传代后，会发生偏离二倍体现象，即染色体数多于或少于正常二倍体染色体数。 2．永生化和恶变 细胞永生化也称不死性，是指细胞获得了无限增殖能力。恶性细胞不仅能长期增殖还具有异体接种致瘤性。在体外培养的正常细胞有三个主要的特征，一是具有二倍体核型；二是接触抑制；三是增殖生长期是有限的。而永生化的细胞则具有无限增殖生长性，可无数次传代，并多伴有染色体的变化。 永生化的细胞不一定具有恶性，但却易进一步演变成恶性细胞，因此人们认为永生化可能是癌变过程中的一个早期阶段。 三、生长特征 体外动物细胞在生长规律上与体内的细胞不同，两者甚至相差较大。经原代培养后，转移一部分原代培养物到新的培养瓶中的培养方式，叫做传代培养或继代培养。其特点有贴附伸展，接触抑制，密度抑制。 体外培养动物细胞的生长与增殖 一、单个细胞的生长过程 一个细胞从上一次分裂结束后至下一次分裂结束，称为一个细胞周期。细胞周期可分为G1期、S期、G2期和M期四个时期。培养的单个细胞的生长过程与体内单个细胞生长过程相似。 二、细胞系的生长过程 体外培养细胞的分裂次数是有限的，当细胞自动物体内取出后，在体外培养中大多的细胞仅能持续生长有限的时间，然后将自行停止生长。进行正常细胞培养时，不论细胞的种类和供体的年龄如何，细胞系的生长过程可分为原代培养期、传代培养期和衰退期(或连续细胞