细胞培养基培训资料比较全面,可以有个初步了解.ppt

购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？ 研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。 为什么大多数细胞培养基中要含有丙酮酸钠？ 丙酮酸钠作为细胞培养的一种能源物质。它往往被加到低葡萄糖组分的培养基中（1.0 g / L葡萄糖），也有时添加到较高的葡萄糖配方中（4.5g/L)。提供细胞生长所需要的碳源 ，在没有葡萄糖时，细胞可代谢丙酮酸钠产生丙酮酸进行能量合成。 培养细胞生长减慢的原因有哪些？其解决办法有哪些？ 答：可能得原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找出可能的原因。 解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷氨酰胺或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物，或用抗生素除菌；血清需保存在-5℃到-20℃；培养液需在2－8℃避光保存；含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2周内用完；分离培养物，检测支原体。 细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？ 答：如果细胞培养基偶然被冻，您应该自然溶解培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。严格意义上要避免细胞培养基冷冻，会影响细胞培养。 HEPES在细胞培养过程中起什么作用？ HEPES溶液：是一种弱酸，中文名字是羟乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培养基pH迅速变化。在开放式培养条件下，培养基脱离了5%CO2的环境，CO2气体迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持pH7.0左右。一般在进行克隆化培养时要添加HEPES。 血清使用时一定需要灭活么？ 实验显示，经过正确处理的热灭活血清对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有作用，甚至因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量。 培养液pH下降很快可能原因有哪些？其解决办法是什么？ 通常细胞生长得非常快时，pH 值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外，培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3 缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。 （1）按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度， 2.0g/L到3.7g/L 浓度NaHCO3对应CO2浓度为5％到10％。 （2）改用不依赖CO2培养液。 （3）松开瓶盖1/4 圈。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。 （4）在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气 培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 （5）如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。 无血清培养基消化贴壁细胞时，用什么终止消化试剂反应？ 通常用无血清培养基进行贴壁细胞传代时，可添加商品化的蛋白酶抑制剂或含有钙镁离子的商品化试剂进行终止反应。 怎样对病毒分离用的鼻咽拭子样本进行处理？ WHO规定用力将含有鼻咽拭子的采样管置于漩涡振荡器中进行混合振荡，振荡后将鼻咽拭子贴紧采样管内壁进行挤压，将拭子含有的病毒采样液全部挤压到采样管中，取出拭子，每ml采样液中添加庆大霉素试剂（50mg/ml）0.2ml，室温下放置15min，1000rpm ，离心5min，取上清液200ul进行接种，其余上清液-80℃冻存。 流感病毒阳性分离率低的原因？ 采样方法及部位（咽部后壁,用力采集） 采集拭子（高采集率及高释放率 ） 采样液（恒定的pH值，渗透压，稳定剂） 运送温度（4℃） 样本处理（污染物，保存温度） 转染率（转染到宿主细胞的数量） 转染的细胞状态（MDCK细胞状态差） 病毒生长液（病毒生长液配制问题） 为什么分离普通流感病毒在细胞培养法中需添加TPCK-胰酶，而鸡胚法不需要添加？ 维持液中加适量胰酶的目的是为了提高流感病毒在细胞中的复制能力。绝大