课题 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

尿素[CO NH2 2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO NH2 2 + H2O CO2 +2NH3 二、课题目标 1、从土壤中分离产生脲酶的细菌 2、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 （一）筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 耐高温菌种提取耐高温酶。 2、活菌计数法 * * 专题3 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 细菌脲酶 一、课题背景 三、研究思路 （一）筛选菌株KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 选择培养基实例 1 加入青霉素可以分离出混杂在细菌中的酵母菌和霉菌； 2 加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌； 3 培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物； 4 培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物； 5 培养基中的氮源只有尿素时，理论上只有能合成脲酶的 微生物才能在上面生长。 D c 1 ．显微镜直接计数法 1 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显 微镜 下计算一定容积的样品中微生物数量。 2 方法：用计数板计数。 3 缺点：不能区分死菌与活菌。 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； （二）统计菌落数目： 1 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板 上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 2 计算公式：每克样品中的菌株数＝ C÷V M 其中 C 代表 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V 代表涂布平板时 所用的稀释液的体积 mL ,M 代表稀释倍数。 【例】若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的稀释液体积为0.1ml,稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数约为 。 8×108 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目 。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 30—300 低 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中，从对应稀释倍数为106的培养基中，A、B两同学分别得到以下两种统计结果。 1、A同学筛选出150个菌落。 2、B同学筛选出50个菌落。 B认为A的培养基被杂菌污染了，或培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长。A确认自己的操作无误，但也拿不出能令人信服的证据。 请你帮助A同学改进实验，提供具有说明了的证据。 D A 土壤取样 → 样品稀释和涂布 → → 微生物的 培养 → 观察并记录结果 → 细菌计数 三、实验设计 以活菌计数法为例 制备培养基 （一）土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 二 制备培养基： 制备以 为唯一氮源的 培养基。 （以 培养基作对照） 尿素 选择 牛肉膏蛋白胨 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因： 目的： （三）样品的稀释与涂布 不同微生物在土壤中含量不同 保证获得菌落数在 之间、适于计数的平板 30—300 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板， 则说明稀释操作比较成功 （四）微生物的培养与观察 本实验中，在菌落计数时，每隔 统计一次菌落数目。 选取 时