蝎毒神经元营养活性肽抗癫痫作用及研究.pdfVIP

蝎毒神经元营养活性肽抗癫痫作用的研究 硕士生姓名： 罗 杰 指导教师： 李 韶 教授 指导小组： 张万琴教授 赵 杰 教授 吴雪飞 副教授 专业名称： 生理学 摘 要 目的： 机制目前并不十分清楚。但其发作的电生理本质都是脑部神经元过度同 步化放电，从而引起大脑短暂的功能障碍。本病长期反复发作，不仅使 患者体躯遭受痛苦，而且在一定程度上导致精神及社会心理障碍，使其 在智能及人格方面均受到损害。正是由于癫痫病的复杂性、难治性及用 药的多样性，因此抗癫痫药物的开发急需等待突破。 martensi 在药物筛选中，我们发现东亚钳蝎(Buthus Karsch，BmK)对难 治性癫痫有明显药效。全蝎入药治疗癫痫已有几千年的历史，其药效在 于蝎尾中的毒液组分蝎毒(scorpionvenom，sv)。SV具有明显的抗癫痫 作用，但成分复杂，毒性很强，使得其临床应用受到很大限制。我室长 期从事蝎毒药物开发研究，从蝎毒毒素中提取出具有抗癫痫作用的组分。 1 通过特殊工艺，得到分子量为3 venom 。 neuro．nourishingpeptide，svNNP)(国家发明专利：ZLO 与SV粗毒相比，svNNP不仅毒性明显降低，且抗癫痫作用增强。 因此本研究的主要目的是从整体和细胞水平进一步探讨svNNP抗癫 痫的神经保护机制，为蝎毒药物的开发提供新的理论依据。 方法： 在体大鼠及体外培养神经元制备癫痫模型，应用全细胞膜片钳技术、 多水平观察蝎毒神经营养活性肽抗癫痫作用的机制。 结果： 一、体内试验： svNNP，观察行为学改变、免疫组织化学影响，结果显示： 1．svNNP给药组25min内癫痫发作次数较对照组减少，但发作级别 尚无统计学意义(n=5，P0．05)，而各实验组动物隐藏平台获得实验及空 间搜索实验逃避潜伏期和穿越平台的次数比较无显著意义(n=5， P0．05)。 突起不规则，分支多而短曲，表面不光滑，细胞类型由模型组的纤维型 星形胶质细胞转化为用药组的原浆型星形胶质细胞。 3．MAP2免疫组织化学显示svNNP给药组与模型组相比树突断裂数 明显减轻，神经元脱失及树突形状明显改善。 二、体外实验： 1．免疫细胞化学：体外培养海马神经元及胶质细胞，预孵育SV粗毒 derived factor， 和svNNP24h后脑源神经生长因子(brain neutrophic 组与SV粗毒给药组及正常对照组相比较BDNF免疫反应染色加深，阳 性细胞数目明显增加(PO．01)，染色变深，推测svNNP可增加胶质细 理组较对照组比较神经元形态完好，细胞之间连接紧密，BDNF免疫反 应阳性染色及免疫反应阳性细胞明显增强(PO．01)。 2．细胞存活能力：MTT法观察蝎毒提出物对原代培养海马神经元存 活的影响，发现SV粗毒组与正常组相比较OD值明显降低(PO．05)； 高细胞存活力，而粗毒却具有毒性作用，降低原代培养海马神经元的细 胞存活力。 3．受体门控通道：体外培养海马神经元，急性加入NMDA诱导NMDA 受体激活电流(／NMDA)，观察不同浓度svNNP(10-3I-tg／ml、1O—llg／ml、 五种不同浓度的svNNP均能降低海马神经元／NMDA(n=8，P0．01)，而且具 有浓度依赖性。 4．电压门控钠通道：采用红藻氨酸(Kainicacid，KA)制备原代培养 海马神经元的兴奋毒性损伤模型，孵育svNNP24h，