焦化废水中降酚菌分离的分析降酚基因初步及研究.pdf

上海交通大学硕士论文 焦化废水中降酚菌的分离分析及降酚基因初步研究 摘 要 本文应用一系列分子方法对三种不含苯酚的培养基 YPG 2 10%YPG 和LB 从上海焦化厂废水处理系统 A /O 法 好氧池悬浮 污泥分离到24 株降酚菌进行了分析鉴定 同时 对山西焦化厂分离 到的一株降酚菌 暂定名为Alcaligenes faecalis IS-17 应用mini-Tn5 转座突变获得了29 株突变株 并使用酶切和PCR 的方法对这些降酚 菌突变株进行了分析 对24 株降酚菌运用 16S rRNA 基因PCR 扩增产物的限制性酶切 分析(amplified ribosomal DNA restriction analysis, ARDRA) ERIC-PCR 指纹图谱分析 多组分苯酚羟化酶大亚基 the largest subunit of the multi-component phenol hydroxylase, LmPH 基因的PCR 扩增及16S rRNA 基因测序的方法对这些降酚菌株进行基因型分析 通过ARDRA 分型 将 24 株降酚菌分为 8 个类型 利用ERIC-PCR 可以将这24 株降酚菌分为17 种类型 说明同一ARDRA 类型的菌株 具有多样性 对17 个ERIC 类型代表菌株的 16S rRNA 基因扩增产物 进行克隆并测序 在GenBank 和RDP 中进行序列比对 结果表明 与这 17 个代表菌株同源性最高的菌中 有6 株菌未见有降酚功能的 报到 在24 株降酚菌中 19 株在苯酚含量为200mg/l 的MP 培养基 中培养五天 苯酚降解率为20%左右 其余5 株Rhodococcus 属菌株 III 上海交通大学硕士论文 苯酚降解率达到 100% 该研究在降酚菌生物多样性上作了有益的探 索 由于另一株降酚菌株(Alcaligenes faecalis IS- 17)用苯酚羟化酶基 因特异引物扩增不出目的条带 可能存在特异的降酚功能基因 因此 本研究对该菌株的苯酚降解相关基因进行了突变分析 通过mini-Tn5 转座突变 得到 29 株突变菌株 碳源生长实验表明 所有的突变菌 株都失去了在以苯酚为唯一碳源的培养基上生长的能力 部分突变菌 株也失去了在以甘露醇 麦芽糖 苯甲酸为唯一碳源的培养基上生长 的能力 但有6 株突变菌株可以在以苯甲酸为唯一碳源的培养基上生 长 说明这6 株突变株为苯酚至儿茶酚代谢的功能基因发生了突变 设计了酶切和 PCR 扩增相结合的方法对这 29 株降酚菌突变株 mini-Tn5 两侧的基因进行了分析 发现多数来自与基础代谢相关的基 因 但没有得到苯酚降解相关的基因的序列 关键词 焦化废水 ERIC-PCR LmPH 转座突变 半随机PCR IV 上海交通大学硕士论文 THE ISOLATION AND ANALYSIS OF THE PHENOL-DEGRADING BACTERIA IN THE COKING WASTEWATER AND PILOT STUDY OF THE PHENOL HYDROXYLASE GENE ABSTRACT In this thesis, 24