结核杆菌Ag85AGM-CSF基因共表达DNA疫苗基础及研究.pdfVIP

DNA疫苗基础研究 研究生陈峻崧导师窦骏(教授) 东南大学医学院 中文摘要 结核病是由结核杆菌引起的一种传染病，全I上[界约有20亿人感染过结核杆 菌，每年约有200～300万人死于结核病。当前唯一可用的疫苗一卡介苗(Bacille Calmette Guerin，BCG)的免疫效果下降，对其保护效果也存在争议，经试验证明 其总有效率仅为50％。而且对成年人的免疫效果也不明确，因此现在急需研制出 新型疫苗。 国内外学者在结核DNA疫苗方面进行了一系列的研究，其中A985A作为靶 抗原取得了一定的效果，但以其作为DNA疫苗的靶抗原，仍需要一定的改进。 近年研究发现，粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(Granulocytemacrophagecolony factor，GM—CSF)由多种细胞分泌，能够刺激和活化专业APC，提高体液 stimulating T 免疫和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)应答，因而是基因免疫 极有运用前景的细胞因子。 本研究将GM．CSF编码基因与目的基因构建于同一载体上，依靠GM—CSF 的免疫佐剂作用，提高A985A基因的免疫效果。 本实验成功构建了结核杆菌A985A和细胞因子GM—CSF共同表达载体，然 后免疫小鼠，观察共表达质粒的免疫效果，为结核杆菌DNA疫苗的研制提供一 种新的思路和方法。本实验分为两个部分： 一、结核杆菌A985A和细胞因子GM．CSF共同表达载体 的构建、鉴定与蛋白表达 目的：构建、鉴定结核杆菌A985A和细胞因子GM．CSF共同表达质粒，为研究 新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法：从结核杆菌H37Rv株基因组 同表达质粒p185AGM。然后转染7721细胞(肝癌细胞)，进行蛋白的表达和鉴 定。结果：经酶切鉴定和DNA测序证实共同表达载体构建正确。通过RT-PCR、 达正确。结论：细胞因子GM—CSF和结核杆菌A985A共同表达载体构建成功， 为研制新型结核杆菌DNA疫苗在动物体内免疫效应的研究奠定了基础。 二、结核杆菌A985A和细胞因子GM．CSF共同表达载体 对小鼠的免疫效果 目的：研究结核杆菌A985A和细胞因子GM。CSF共同表达质粒对小鼠的免疫效 果，为设计新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的思路。方法：将重组质粒免疫小 鼠，通过CTL和NK细胞杀伤活性和特异性淋巴细胞增嫡试验，以及小鼠血清 抗体的检测．考察结核杆菌A985A和细胞因子GM—CSF对小鼠的免疫效果。结 果：共同表达载体A985A与GM—CSF免疫组小鼠的CTL活性明显增强、特异性 淋巴细胞明显增殖，NK细胞杀伤活性与对照组相比有一定提高，但未超过 GM．CSF单独免疫效果。可引起小鼠血清特异性抗体产生，但滴度较低。结论： 细胞因子GM．CSF和结核杆菌A985A共同表达载体构建成功，对小鼠有一定的 免疫效果，为进一步在动物体内进行保护性效应试验研究提供了条件。 关键词：结核杆菌；GM，CSF：抗原85A；重组质粒；基因疫苗 央卫删坚 THEBASIC RESAERCHIN CO．EXPRESSIONDNA VACCINE0F TUBERCULOSISANTIGEN85AAND GM—CSF JUNSONG Postgraduate：CHEN DOUJUN supervisor：Professor of MedicalSchoolSoutheast University