胚乳中不表达基因组片段分离磷代谢品种差异的分析.pdf

中文摘要 对水稻进行品质改良，转基因技术是目前被，1泛使用的一种行之有效的方 法。在外源基因上连上水稻自身的启动子不仅能够实现外源基因在受体体内的定 向表达，还从某种程度上缓解了外源基因在受体体内表达沉默的问题。在本实验 中利用本室构建的平衡化明恢63全生育期cDNA文库点阵膜来进行在胚乳中特 异性不表达的cDNA克隆的筛选，分别用来自水稻不同器官中的RNA反转录制 成放射性eDNA探针与cDNA点阵杂交，通过比较不同探针与点阵杂交所得到 的杂交图像，得到了一批在胚乳中特异性不表达的克隆，对它们进行Northern IOKDa蛋白前体的cDNA克隆 检测和序列分析，从中挑选出编码水稻光系统II EI#44P17来制备探针筛选58N 步的分析，从中分离得到长度为6．2kb与EI#44P17同源的基因组片段，对其进 行了预测，两者的预测结果一致，都包含了编码该前体蛋白的完整ORF。 本实验的另一部分是通过cDNA芯片对两种低磷情况下的敏感材料(中早 18和Lagrue)进行低磷胁迫后的表达分析，找到二者间的表达差异。从三叶期 开始进行低磷胁迫处理，分别于胁迫后不同时间段不同器官进行取样并抽提 RNA。来自不同材料和不同器官，取于不同时间的RNA分别与对应的非胁迫处 理材料作为一组探针标记上不同的荧光标记来进行芯片杂交，芯片上包括明恢 “黄点实验”分析决定差异表达的极限值分别为1．78和0．55。来自不同材料， 不同时期和部位的探针经过芯片杂交后得到的差异表达的克隆数各不相同。部分 由芯片杂交得到的芹异克隆经过Northem杂交得到了进一步的验证。对这些克隆 进行序列分析发现它们编码了各种功能的酶和蛋白，涉及到植物生理生化的各个 方面，其中部分已经被报道与低磷胁迫有关。对低磷胁迫消减杂交文库的序列分 析也得到了相似的结果。根据Notthem杂交和序列分析的结果，可以找到两种材 料之间的表达差异：首先，中早18对低磷反应较Lagrue激烈；其次，中早18 具有在一定时间内持续产生有机酸的机制，而在Lagrue中没有检测到；最后， 低磷胁迫能够造成氮素代谢不正常，Lagrue受低磷胁迫的影响要远大于中早18． 3 Lagrue中许多参与氮代谢的酶的表达大大降低。这些基因表达的差异很可能是造 成中早18和Lagrue在低磷条件下生长发育状况，结实率以及干物质积累等重要 生理参数不同的原因。 关键词：水稻 cDNA点阵差异表达胚乳cDNA芯片低磷胁迫 4 Abstract is usedinrice Call wildly Transgenictechnology improvement．Theforeigngene directional of andrice itcouldreduce express bylinkageforeigngene promoter,and the of silence．The ofthis wastoidentify probabilityforeigngene objectivestudy rice eDNA thatno in endospermbyeDNA array genes expression arrayanalysis．The normalized was 63 eDNA isolated madebasedon