胚胎发生晚期丰富蛋白基因对水稻细胞转化再生植株的分析.pdf

摘 要 摘 要 水稻是世界上最重要的禾谷类作物之一 但是在生产中由于病虫害和不良气 候与逆境的影响危害 水稻的高产 稳产受到了严重的制约 水稻的抗性转基因 研究在过去的十几年中取得了重大的进展 以水稻 中作8593 的成熟胚作为材料 在 LS+2,4-D2.0 培养基上诱导和继 代培养愈伤组织 选择生长状态良好的胚性愈伤组织作为受体组织 利用基因枪 将含有来自大麦的胚胎发生晚期丰富蛋白LEA 基因导入水稻愈伤组织细胞 将转 化后的愈伤组织接种到 CARS+Bialaphos8.0 和 KPRS+Bialaphos8.0 的选择培养基 中进行选择培养 连续选择 2 次 将抗性愈伤组织转接到附加 KT1 .0+ZT1 .0 +BA1.0+NAA0.1 的MS 培养基上进行再生培养 两个月后得到了转化再生苗 提取转化植株的总 DNA 进行 PCR 扩增 检测到转化植株中含有目的基因片 段 电泳结果显示转化植株的电泳条带大小与质粒的电泳条带大小相同 未转化 植株在相应的位置没有条带出现 在苗期对转化植株进行了抗性生理检测 在盐胁迫实验中 使用0.1% 0.3% 0.5% 0.7% 1%五个浓度的NaCl 溶液持续胁迫处理转化植株和对照植株 转化 植株出现萎蔫死亡的时间较对照推迟了10 天以上 在持续胁迫处理的情况下 转 化植株的全部萎蔫死亡的时间较对照推迟了15 天以上 由此明显地观察到转化植 株对不同浓度的盐胁迫都较对照表现出良好的抗性性状 在水杨酸诱导胁迫实验中 使用转化植株依然表现出较对照具有较强的抗性 但是对照的POD 活性高峰点仅次于No.2 综合实验结果表明 LEA3 基因导入并整合到水稻基因组 与对照相比转化植 株抗旱耐盐性明显增强 并且在受到盐胁迫时 转化株萎蔫症状出现晚 受害程 度轻 到最终死亡的间隔时间也较长 在水杨酸诱导的渗透胁迫下转化植株表现 也出良好的抗性 关键词 水稻 LEA3 基因 转化 再生 渗透胁迫 I Abstract Abstract Rice is one of the most important graminaceous crops. Every year virus and pests cause serious damage to rice production. Research on resistance gene engineering of rice has great improvement in past ten years. Recently reports for resistance-transgenic rice are mainly about virus and pests resistance. Chosing mature embryo of “Zhongzuo8593” as material to inducte callus on LS+2,4-D 2.0. Calli of rice were transformed by particle bombardment with plasmid pBY520 containing late embryogenesis abundant protein gene, LEA3, from barley (Hordeum vulgare L.). The bombarded calli were transformed to media CARS+Bialaphos8.0 and KPRS+Bialaphos8.0