医学课件-3光谱分析基础及紫外-可见光分光光度计.pptVIP

光谱分析基础及紫外－可见光分光光度计 主要内容 光谱基础知识 郎伯_比尔吸收定理 紫外可见光分光光度计的原理和结构 紫外可见光分光光度计的性能评价 各种颜色的波长范围 光 的特征 光的波粒二象性： 微粒性 波动性 E 为光子的能量；ν为光波的频率（Hz）； h为普朗克常数（6.626×10-34 J.s ）; c为光速（2.9977×108m／s）；λ为光波的波长 光谱分析（spectral analysis) ：对物质发射的辐射能能谱进行的分析或对辐射能与物质相互作用引起的能谱改变进行的分析。 ：基于物质发射的电磁波辐射及电磁辐射与物质的相互作用而建立起来的分析方法。 光谱分析基础理论 吸收光谱:即物质对不同波长光的吸收程度不同而产生的光谱。其吸收光谱取决于物质的结构.包括原子吸收光谱和分子吸收光谱 原子吸收光谱原理 只有光子的能量与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差相等时，才能被吸收。 分子吸收光谱原理 物质分子内的三种运动方式：1.电子相对与原子核的运动、2.分子内原子在其平衡位置移动、3.分子本身绕其中心转动 三种运动方式决定分子具有三种能级：电子能级、振动能级、转动能级 分子吸收光谱原理 当用可见光照射分 子时，价电子可以 跃迁产生吸收光谱 ，在电子能级变化 的同时，不可避免 地伴随分子振动和 转动的能级变化。 因此他包含了大量 谱线，并由于这些 谱线的重叠而成为 连续的吸收带。 光谱种类 当依次将各种波长的单色光通过某一有色溶液，测量每一波长下有色溶液对该波长光的吸收程度（吸光度A），然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条曲线，称为该溶液的吸收曲线，亦称为吸收光谱。 吸收曲线讨论： 光谱分析技术的基础理论 朗伯-比尔定律： I0：入射光强度 C:溶液浓度 b:液层厚度 I:透射光强度 T:透光度 A:吸光度 k:吸光系数 光谱分析技术的基础理论 朗伯-比尔定律的适用条件： 1.入射光为单色光。波长范围越大，单色光纯度越低，对郎伯-比尔定律的偏离越大； 2.溶液中邻近分子的存在并不改变每一给定分子的特性，即分子间互不干扰。 3.适用于分子吸收和原子吸收 光谱分析技术的基础理论 发射光谱:由物质分子或原子吸收了外来的能量后发生分子或原子间的能级跃迁而产生的光谱。 发散光谱分析方法就是根据每种元素特有的线光谱来识别或检查各种元素。 紫外－可见光分光光度计 光源（light source）：提供入射光的装置。 要求: 1.能在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱； 2.有足够的辐射强度并能长时间稳定。 常用的光源有热辐射灯（钨灯、卤钨灯等），气体放电灯（氢灯、氘灯及氙灯等），金属弧灯（各种汞灯）等。 单色器（Monochromator）：是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的装置。 入射狭缝：限制杂散光进入； 色散元件：将复合光分解为 单色光，有棱镜和光栅两种； 准直镜：1.从入射狭缝来的 光线经准直镜反射，变为平 行光投照到色散元件上;2. 将来自色散元件的平行光 束聚集在出射狭缝上； 出射狭缝：将固定波长范围 的光射出单色器，可以限制 通带宽度。 狭 缝 色散元件 分棱镜和光栅两种 光 栅 色散均匀、谱线清晰、工作波段宽是棱镜无法比拟的 原指大量等宽、等间距的平行狭缝所组成的元件 实际所使用的光栅多为反射型复制光栅，它是在平面玻璃上黏结上一定角度刻槽的铝反射膜而制成 准直镜 吸收池（absorption cell）：又称比色皿，是用来盛放被测溶液的器件。在可见光区常用无色光学玻璃或塑料制作；在紫外区需用能透紫外线的石英或熔凝石英制作。 同一套吸收池的厚度、透光面的透射、反射、折射应严格保持一致。指纹、油污及池壁上的沉淀物都会影响吸收池的透光性能。 国际规定，液层厚度为10mm的比色皿为标准比色皿。 通过改进吸收池的几何形状，可提高“光程/体积比”，即尽可能延长单位体积的光程。 常用的有： 微型吸收池（Microdrill absorption cell） ：“光程/体积比”提高了近10倍。 多光路吸收池（Multipie-path absorption cell）：在吸收池壁上装有反射镜，使光线在溶液中经多次反