人工神经纳米纤维支架材料体外筛选的研究.pdf

目录 摘要………………·………………·………···………………………………………·1 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………3 前言………………………“…“……·…··……··……………………………………5日U青………………………“…“……”…”……”…………………………………“5 第一部分：雪旺细胞株的体外培养和鉴定………………………………………12 材料与方法……………………………………………………………………12 结果…………………………………………………………………··………·18 讨论…………………………··………………………………………·………22 d、结……………………………………………………………………………24 参考文献………………………………………………………………………25 第二部分：PLLA及其与PCL共聚物的体外筛选………………………………27 材料与方法……………………………………………………………………28 结果……………………………………………………………………·……··33 讨论………………………··…·”…··………··…………………·…………··47 以、结………………………··………………………………···………………·53 参考文献………………………………………………………………………54 附录一：综述………………………………………………………………………56 附录二：英文缩略词表……………………………………………………………65 后记：致谢…………………………………………………………………………67 人工神经纳米纤维支架材料体外筛选的研究 摘要 摘要 第一部分：雪旺细胞株的体外培养与鉴定 目的：对体外培养的雪旺细胞株进行包括细胞形态、生长规律、纯度和基因表型 进行观察和检测，比较其与正常雪旺细胞的差异，鉴定其是否可应用于人工神经 纳米纤维支架材料的体外筛选。 方法：取雪旺细胞株RSC96常规进行传代培养，观察细胞的形态变化和生长规 律；针对雪旺细胞特异性标志物S．100抗原进行免疫荧光染色，显微镜下观察 ● 情况。 结果：雪旺细胞株在传代后36小时，具有典型雪旺细胞形态，且生长规律与正 常雪旺细胞相似，但时间缩短；S．100免疫荧光染色，所有细胞均S．100抗原表 达阳性，纯度达100％，且S．100抗原在细胞内分布规律与正常雪旺细胞相同； 雪旺细胞重要基因表达均为阳性，没有发生缺失。 结论：雪旺细胞株RSC96在细胞形态、生长规律等方面与正常雪旺细胞相近， PMP22表达阳性，具备正常雪旺细胞功能，且增殖速度快、不易退化，因此可 应用于人工神经支架材料的体外筛选。 关键词：雪旺细胞株；永生化；纯度；基因 中图分类号：R68 人工神经纳米纤维支架材料体外筛选的研究 摘要 第二部分：PLLA及其与PCL共聚物纳米纤维支架材料的体外 筛选 三种不同纳米纤维支架材料，以及同一成份不同制备工艺的纳米纤维支 架材料，在体外应用雪旺细胞株对其进行鉴定比较，筛选出更适合进行 体内试验的人工神经纳米纤维支架材料成份和制备工艺。 方法：通过扫描电镜观察纳米纤维支架材料的显微结构，并与细胞外基 质显微结构进行比较：通过细胞增殖试验、细胞粘附试验和细胞形态学 的观察，鉴定比较三种纳米纤维支架材料的生物相容性；同时观察纳米 Time 纤维细丝取向对细胞排列的影响；通过Real PCR相对定量检测三 - 基因表