香菇多糖提取、纯化、结构表征及其生物活性的研究.pdf

摘要 本文以香菇(Lentinus edodes)为原料，系统研究了香菇多糖 (1entinan)的提取、分离、纯化、纯度鉴定、理化性质、化学结构， 并对不同分子量香菇多糖的体外抗乙型肝炎病毒活性进行了测定。现 有制备高纯香菇多糖的技术比较复杂，产品价格非常高，针对香菇多 糖的应用前景和开发现状，本论文将开发从香菇中分离纯化高纯香菇 多糖的工业技术作为研究重点，旨在得到易于工业化的流程短、工艺 简单、经济、高回收率和高纯香菇多糖的工艺路线。主要研究内容与 结论如下： 1．对香菇多糖的提取方法进行了系统的研究，分别考察了热水浸 提、超声波辅助热水浸提、微波提取、酶法辅助热水浸提四种提取方 法，优化了提取工艺。研究证明：热水浸提得到的香菇多糖提取得率 为4．53％，产品纯度23．2％；超声波辅助热水浸提方法多糖提取得率 为4．48％，产品纯度21．5％；微波提取多糖提取得率4．44％，多糖纯 度24．2％；酶法辅助提取多糖提取得率为6．63％，多糖纯度32．1％。 和热水浸提法相比，超声波辅助热水浸提法提取温度低，提取时间短， 微波提取能大大缩短提取时间，酶法辅助热水提取能显著提高多糖提 取率，所得粗产品纯度高。酶法提取是一种较理想的多糖提取方法。 2．采用壳聚糖对多糖提取液进行沉降，除去溶液中悬浮颗粒、 胶状物质，部分色素和蛋白质杂质，提高溶液的澄清度，降低溶液的 粘度。实验优化了壳聚糖沉降提取液的工艺条件。多糖溶液中色素降 低26％，蛋白质浓度降低35％，溶液粘度降低15％。 3．采用超滤方法对香菇多糖提取液进行分离与分级，选用两种 别为70．5％，52．3％，26．3％。Lel为基本不含蛋白质的低分子量多糖， Le2为含少量蛋白质的中等分子量多糖，Le3为含大量蛋白质的大分 子量多糖。超滤分离最佳操作压力为O．15MPa，温度35℃，pH7．0。 对膜污染机理和膜清洗方法进行了探讨，通过凝胶极化模型对超滤分 离香菇多糖的膜阻力进行分析，阻力模型很好的拟合凝胶极化模型。 4．首次采用八种离子交换树脂和大孔吸附树脂对香菇多糖溶液 脱色，发现大孔吸附树脂DA201．C具有最好的脱色效果，同时对蛋 白质也有一定的分离效果，对DA201．C大孔树脂分离香菇多糖中的 色素工艺进行了优化，多糖溶液的脱色率为87．7％，蛋白质的去除率 为42．O％，多糖的损失率为15．O％。经树脂脱色后，三种多糖Lel、 Le2和Le3的纯度分别为85．3％、72．9％、49．6％。 5．首次采用阴离子交换树脂分离香菇多糖中的蛋白质，优化了 717型阴离子交换树脂除蛋白的工艺条件，酸度足影响蛋白质吸附效 溶液再生，经过再生后，树脂的吸附率可恢复90％。分离蛋白质杂质 38．7％，分离蛋白后，蛋白质含量分别降为O．5％，1．6％和6．4％，多糖 纯度分别为95．1％、89．5％、86．4％。 6．对蛋白质吸附动力学研究表明，717型阴离子交换树脂分离多 糖提取液中的蛋白质的吸附过程是单分子层的离子交换过程，是放热 的吸附过程，低温有利于吸附。膜扩散速率是离子交换树脂吸附过程 的控速步骤，蛋白质的吸附等温线可用Langmuir方程来模拟。 G．200柱层 7．研究了Lel、Le2和Le3的理化性质。经Sephadex 析、琼脂糖凝胶电泳分析表明：Lel、Le2和Le3均为单一多糖，三 种多糖纯度分别为99．2％，97．8％和96．5％。单糖组成分析表明：Lel、 Le2和Le3均由阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖五种单糖 组成，其中葡萄糖为主要组分，Lel、Le2和Le3中阿拉伯糖，木糖， 胶柱层析测定多糖分子量表明，Lel、Le2和Le3的平均分子量分别 Lel主要是含a糖甙键的葡聚糖，Le3主要是含p糖甙键的葡聚糖， 而Le2是既含有a糖甙键，又含p糖甙键的葡聚糖。 8．测定了三种香菇多糖Lel、Le2和Le3的体外抗乙型肝炎病毒 活性，结果表明三种香菇多糖都有一定的抗病毒活性，其中Le3活性 最强，Le2活性次之。表明香菇多糖的生物活性与多糖的分子量大小 有一定关系。 关键词：香菇多糖，提取，纯化，脱色，脱蛋白，超滤，活性 Ⅱ