《MNC驱铅对Caco-2细胞增殖率、LDH活性及细胞形态的影响 Impacts of Montmorillonite Nanocomposite as a Pb-sorbent on Caco-2 Cell Proliferation Rate,LDH Activity and Cellular Morphology》.pdfVIP

2013年黧49橼黧19期 NutritionandFeedstuffs·蘑蓠斓料 细胞形态的影响 余东游+，尚沁沁，史艳云 (浙江大学动物科学学院，农业部华东动物营养与饲料重点实验室，浙江杭州310058) 摘 要：本试验旨在探讨纳米蒙脱石(MNC)驱铅对Caco一2细胞增殖率、LDH活性及细胞形态的影响。结果表明： 随铅浓度的提高，其抑制细胞增殖率也越强，当铅浓度达40、80 mg／L时，铅抑制Caco一2细胞的增殖率显著(P0．05)； 随时间延长，铅抑制细胞增殖率的作用越明显．并呈一定的时效关系：添加O．5％MNC能有效逆转因铅导致的低 细胞增殖率，且其30min解铅毒功效强于60min；30min反应中，大于40 mg／L铅浓度引起Caco一2细胞培养液中 的LDH活性显著高于对照组(P0．05)；120min反应中，大于20 mg／L铅浓度引起的细胞LDH活性显著高于对照 组(P0．05)。但0．1％和0．5％MNC分别添加到含40 min反应后细胞LDH活性都显著 mg／L铅的细胞培养液中．30 低于对照组(P0．05)，且0．5％MNC组显著低于0．1％MNC组(P0．05)。此外，40mg／L毒舀攻毒30min后，发现 Caco一2细胞出现萎缩，呈不规则圆形。细胞间质明显，但同时添加40 mg／L-铅+0．5％MNC后观察。Caco一2细胞维 持正常形态。结果提示，MNC能有效吸附培养液中的铅。阻断铅进入Caco一2细胞，对动物细胞不会产生任何人 毒副作用。 关键词：纳米蒙脱石；铅；Caco一2细胞；细胞增殖率；LDH活性；细胞形态 中图分类号：S816 文献标识码：A 文章编号：0258—7033(2013)19—0033—04 铅是一种具有蓄积性、多亲和性和不可降解的 科学院细胞所。 环境污染物，可毒害全身所有组织器官，并具致畸、 1．2试验方法 致癌和致突变性【l≈】。饲料是引发动物铅中毒的一个 1．2．1 Caco一2细胞的培养含10％灭活胎牛血清、 200 重要来源，其源头是环境铅污染饲料原料所致。与 U／mL链霉素和200U／mL青霉素、L一谷氨酰胺的 发达国家相比，我国动物产品受铅污染状况十分严 DMEM培养基的25cmz培养瓶中加入Caco一2细胞，置 重¨1。本课题先前的研究发现，纳米蒙脱石(MNC) 370C、5％CO：培养箱中培养。待细胞贴生长至80％一 对吸附猪饲料中铅具有较好的应用效果【51，但其对 90％融合时，用0．25％的胰蛋白酶消化细胞，按1：3传 动物的安全性及其作用机理尚不明确。为此，本试 代培养，期间每隔1d换1次培养液。本试验所用细胞 验采用Caco一2细胞模型，模拟动物消化道，着重研究均在15—25代。细胞在融合后使用，使用前力IHank’s 纳米蒙脱石(MNC)对动物肠细胞的直接影响，以评液洗3次，经胰酶消化后，向瓶中加入少量DMEM培 价其在动物体内吸附铅的效果及其安全性，旨为纳 养液吹打成细胞悬液，吸取20¨L细胞悬液和等量 米蒙脱石驱饲料铅毒机理的深入研究和广泛用作畜 2％台盼蓝液混合均匀，滴人细胞记数板在显微镜镜 禽饲料添加剂提供依据。 下记数。根据记数结果调整至所需细胞密度。 1．2．2细胞增殖活力的影响取对数生长期的 1材料与方法