《人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其在人喉癌细胞中的表达 Construction of a lentiviral vector for RNA interference of human EGFL7 gene and its stable expression in human laryngeal carcinoma cells》.pdfVIP

·1864· [文章编号】 1000．4718(2013)10-1864—06 ·实验技术· 人EGFL7基因RNA干扰慢病毒载体的 构建及其在人喉癌细胞中的表达水 张革化， 常利红， 叶进， 庄士民， 王凯， 黎景佳△ (中山大学附属第三医院耳鼻咽喉头颈外科，广东广州510630) factor-likedomain [摘要]目的：构建人表皮生长因子样结构域7(epidermalgrowth 7，EGFL7)基因RNA干 扰(RNA 真核表达慢病毒干扰载体。在POLOdelivererTM3000介导下将慢病毒包装质粒和EGFL7基因重组慢病毒载体导入 293T细胞包装病毒，测定病毒滴度，感染人喉癌细胞HEp-2，杀稻瘟菌素筛选获得稳定干扰EGFL7基因的细胞亚 系。结果：成功构建EGFL7 为5x EGFL7基因的沉默 10“TU／L，实时荧光定量PCR证实pLenti6．3-EGFL7．miR慢病毒载体对喉癌细胞HEp-2 效率为97％。结论：成功构建人EGFL7基因特异性的慢病毒干扰载体，并获得EGFL7基因稳定干扰的喉癌细胞 亚系。 [关键词]EGFL7蛋白；RNA干扰；喉肿瘤；慢病毒 [中图分类号]R363 [文献标志码]A ConstructionofalentiviralvectorforRN入interferenceofhumanEGFL7 anditsstable inhuman carcinomacells gene expression laryngeal ZHANG Ge—hua，CHANGLi-hong，YEJin，ZHUANGShi—min，WANGKai，LI Jing-jia (DepartmentofOtorhinolaryngology-HeadNeck SunYat—SER Surgery，the觋砌AffiliatedHospitalof University，Guang- zhou 510630，China．E-mail：li-ji,涮a@hotmail．corn) AIM：To theroleof factor-likedomain the [ABSTRACT]investigate epidermalgrowth 7(EGFL7)inpathogene- sisand of carcinomavia alentiviral vectorforRNA hu- laryngeal interference(RNAi)of progress constructingexpression manEGFL7and the effectofthevectorinhuman gene assessinggene—silencing laryngealepidermoidcarcinoma(HEp-2) RNAi were focusedonhumanEGFL7 double- seque