《人胎盘膜铁蛋白同类型双亚基功能、铁核结构和释放铁动力学研究 Functions of Double Subunits of a Type, Structure of Iron Corn, and Kinetics of Iron Release from Membrane Ferritin of Human Placenta》.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第2期 ChineseJournalof 155～162 2011年2月 AnalyticalChemistry 人胎盘膜铁蛋白同类型双亚基功能、 铁核结构和释放铁动力学研究 罗联忠1，2 金宏伟1 蔡宗苇3 黄河清q’2 (厦门大学生命科学学院生物化学与生物技术学系1，近海海洋环境科学国家重点实验室2，厦门361005) 3(香港浸会大学化学系，香港) 摘要 以人胎盘组织为实验材料，小批量制备电泳纯人胎盘膜铁蛋白(HPMF)，对其结构与功能进行研究。 十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)技术揭示，HPMF蛋白壳由分子量分别为15kDa(MFl5)和 20 PHMF的MF，，和MF：。亚基与人铁蛋白(HF)L亚基均具有较高的同源性，提出HPMF由单类型但分子量不同 的双亚基组成的新观点。在选用基质辅助电离激光解吸飞行时间质谱(MALDI—TOFMS)技术直接分析 为5．72，明显低于绝大多数哺乳动物铁蛋白，但却高于细菌铁蛋白(BF)。在释放铁动力学方面，HPMF以一级 反应动力学途径释放完整铁核中的铁量，其释放时间约需750rain，其释放铁的速率慢于马脾铁蛋白(HSF)和 猪胰铁蛋白(PPF)(约60win)。根据HPMF完全不同于大部分哺乳动物、植物和细菌铁蛋白的新颖结构与功 能，提出HPMF在母体和胎儿之间中起着释放、储存和转运铁的复合生理功能的铁转运模型。 关键词 人胎盘膜铁蛋白；单类型亚基；亚基作用；铁转运模型；结构与功能 1 引’言 核被球状蛋白壳紧密包裹于全蛋白的中心区域，铁核由数千铁离子和数百无机磷酸盐组成B4】。多数哺 乳动物铁蛋白的蛋白壳均有24个H和L亚基【5．6l，两种亚基在结构与功能上存在差异，H亚基是负责结 合Fe2+，催化铁氧化，并将铁储存在结晶核中；而L亚基是负责提供酸性残基以促进铁核形成，加速铁 ofshark 核长大M。细菌铁蛋白(Bacterialferritin,BF)和鲨鱼肝铁蛋白(Ferritinliver,SLF)的蛋白壳却均 由单类型亚基组成is^¨ol，但如何利用单类型亚基调控铁蛋白的生理功能尚未清楚。隧道结构是由不同 或相同的亚基堆积而成，是构成铁代谢和储存等的通道【l”。铁蛋白释放铁的速率和反应动力学级数转 换与蛋白壳自身产生的柔性调节幅度和速率有关。纠31。如果适当增加铁释放反应介质的pH值，减缓释 放铁的速率，使蛋白壳调整速率和释放铁的速率同步时，铁蛋白能以一级反应动力学途径释放铁，不出 现反应级数和释放铁速率转换现象。 同一组织来源的铁蛋白的亚基组成类型与结构存在差异，这可能与它们特殊的生理功能有关1M啊。 胎盘是胎儿和母体进行物质交换的重要器官，当母体和胎儿血型不同时，胎盘既要隔离不同血型的血 液，还要作为营养与代谢物质交换的通道，起到分离膜和通道的作用。胎盘组织实际上是一种高效分离 与通道的膜组织，具有特殊的物质选择、传递机制。本研究以人胎盘为实验材料，小批量制备HPMF，选 用MALDI-TOF 法p]，研究HPMF铁核组成和释放铁的动力学过程，了解HPMF的结构与功能，以推测其在胎盘转运铁 2010-03—17收稿；2010-09-12接受 本文系国家自然科学基金(No和973项目(No．2010CBl2640)资助 ‘E—mail：hqhuang@xlnu．edu．cn 万方数据 156 分析化学 第39卷 离子过程中的作用和机制。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 50 ICP—MS(加拿大PE公司)；Carybio型紫外可见分光光度计(美国瓦里安公司)；蛋白质分离纯化系统