《体外大鼠肠道菌群代谢脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究 In vitro Biotransformation of Deoxynialenol by Intestinal Microflora of Rats》.pdfVIP

第40卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第1期 ChineseJournalof 119～123 2012年1月 AnalyticalChemistry 体外大鼠肠道菌群代谢脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究 冯培生 沈建忠 吴海霞 李林霞 戴燕玉 刘凯丽 王莹 张素霞’ (中国农业大学动物医学院，北京100193) 摘 要运用超高效液相色谱串联四级杆厂1S行时间质谱(UPLC-Q／TOF-MS)识别和确定脱氧雪腐镰刀菌烯醇 质谱定量分析DON含量变化．比较各段肠管中厌氧菌群的代谢能力。结果表明，DON不能被大鼠小肠菌群 定量测定结果显示。大肠中盲肠菌群代谢能力最强。 关键词体外代谢；肠道菌；大鼠；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；超高效液相色谱串联四级杆厂1S行时间质谱 1 引 言 酮，俗称呕吐毒素，属于B型单端孢霉烯醇类毒素。DON是由镰刀菌属中的禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌 产生的次级代谢产物“捌。DON能够引起动物增重下降、食欲减退、营养吸收率降低、呕吐等慢性毒性作 用；对真核细胞和原核细胞均具有明显的细胞毒性；DON能诱导免疫细胞凋亡、抑制其增殖，同时还影 响免疫细胞因子的分泌【3】。通常，毒性物质经体内生物转化后毒性会降低，然而有时生物转化后会形成 毒性增强的代谢产物。 利用气相色谱一质谱(GC—MS)已研究DON多种动物模型，但仅识别和鉴定出一种I相代谢产物脱 质谱(LC—MS)已成为最合适、最有效的分析方法【9】。本研究运用超高效液相色谱串联四级杆／飞行时间 液相色谱提供的更快、更灵敏的色谱分离能力和四级杆飞行时间质谱精确质量数测定优势1”，借助代 defect 谢产物识别软件Metabolynx船自动分析采集样品信息，特别是质量缺失过滤(Massfilter,MDF)的 应用能有效剔除假阳性结果，从而提高分析效率02d31。 2 实验部分 2．1仪器、试剂与动物 BEH C18色谱柱)，Alliance ACQUITYTM超高效液相色谱(配Acquity RP Associates公司)；旋涡混合器(北方同正生物技术发展公司)。 司)；氮吹仪(美国Organomation 任公司)，超纯水由Milli-Q纯水仪(美国Millipore公司)自制。 Wistar大鼠(体重220～250 h，自由饮水。 g，北京维通利华实验动物技术有限公司)，禁食12 201卜03-07收稿；201卜05-29接受 本文系“973”国家重点基础研究发展计划课题(No．2009CBll8801)资助 ’E-maik suxia@cau．edu．cn 万方数据 120 分析化学 第40卷 2．3实验方法 2．3．1大鼠肠道厌氧菌群培养液制备大鼠脱椎致死后迅速打开腹腔，分离肠管，转移至厌氧培养箱 中。在培养箱中取出肠道内容物，按l：15(re／V)比例加入厌氧培养基溶液，用四层纱布过滤获得厌氧 菌群培养液。 2．3．2DON在厌氧菌群中孵育条件厌氧培养箱中混合气组成为5％H：，5％CO：和90％N：。培养 DON标准溶液(2．5 温度设为37℃。10laL g／L)加入5mL大肠或小肠厌氧菌群培养液中，阴性对照中 加入等体积的甲醇。厌氧环境中，37℃孵育24h后，一20℃冷冻保存；10DON标准溶液(2．5