《中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 Prediction and Identification of Structural Proteins of Chinese Sacbrood Virus LN Isolate》.pdfVIP

V01．32 高等学校化学学报 No．8 OF 1768—1773 2011年8月 CHEMICALJOURNALCHINESEUNIVERSmES 中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 马鸣潇1，马 臣2，程健1，谢振声3，李明1，费东亮1 (1．辽宁医学院实验动物中心，锦州121001；2．赤峰市翁牛特旗中蒙医院，乌丹024500； 3．中国科学院生物物理研究所蛋白质组学平台，北京100101) 摘要采用反转录聚合酶链反应(RT．PCR)方法、生物信息学软件和质谱分析对中蜂囊状幼虫病毒(CSBV) 辽宁株(CSBV．LN)全基因组进行了分子克隆、序列测定、分子生物学特性分析及结构蛋白预测和鉴定．结果 nt的5’非编 表明，CSBV．LN全基因组序列长度为8863个核苷酸，编码一个大的开放阅读框，其中包括178 码区的前导序列和79nt的3’非编码区，后面跟着一个poly(A)的尾巴．通过软件分析表明，CSBV—LN蛋白 序列类似于哺乳动物的小RNA病毒蛋白序列，预计存在VPl，VP2，VP3和VP4等4个小的结构蛋白；系统 白的裂解位点．在此基础上，对纯化后的CSBV进行SDS—PAGE分离，对分离到的4个蛋白进行质谱分析， 结果鉴定出VPl，VP3和VP03个蛋白． 关键词 中蜂囊状幼虫病毒；反转录聚合酶链反应；结构蛋白；质谱分析 中图分类号0629；S895．1+33文献标识码A 中蜂囊状幼虫病是由中蜂囊状幼虫病毒(CSBV)引起的一种分布广、发病率高且传染快的传染病， 一旦发生就会对中蜂幼虫造成毁灭性打击，甚至引起整个蜂群毁灭¨’21．该病于1972年在广东首次发 生，随后迅速蔓延至全国乃至东南亚．目前，该病的危害日趋严重，不但严重威胁着养蜂业的发展，而 且也严重影响虫媒植物的生长，破坏了生态平衡．特别是2008年以来，辽宁地区多次发生中蜂囊状幼 虫病旧】，造成了重大经济损失，严重影响了中蜂业的发展和保种工作．CSBV属于小RNA病毒，其结 No． 3和CSBV广州株CSBV-GZ(GenbankNo．AF469603)编码区基因测序一1． AF092924．1)全基因组测序【4 SBV—UK和CSBV．GZ均包括一个大的开放阅读框，编码一个大的多聚蛋白，比典型的哺乳动物微小核 糖核酸病毒(约7500 基因组研究仅局限于一些毒株的测序，而对其分子生物学特性、遗传进化关系，尤其是结构蛋白的研 究尚未见报道．本文以在辽宁地区分离到的毒株CSBV—LN作为参考毒株，对CSBV全基因组进行了克 隆、遗传进化分析及结构蛋白的预测和鉴定，该研究结果为CSBV结构蛋白的免疫原性研究、致病机 理研究以及体外培养等奠定了基础． 1 实验部分 1．1实验材料 1．1．1 CSBV病毒CSBV—LN病料取白辽宁清原自然感染的某蜂场． 1．1．2试剂-9仪器AMV逆转录酶和exTaqDNA聚合酶、pMD一18-T载体及各种限制性内切酶均购 购自北京威格拉斯技术有限公司产品． 收稿日期：2011-014)6． 基金项目：国家自然科学基金(批准号和辽宁省教育厅项目(批准号：2009A464)资助 联系人简介：马呜潇，男，博士，副教授，主要从事分子病毒研究．E·mail：lnjnnmx@163．com 万方数据 No．8 马鸣潇等：中蜂囊状幼虫病毒结构蛋白预测与鉴定 1769 CFR+一MALDI．TOF生物质谱仪(日本岛津公司)． 1．2实验过程 1．2．1 度的病毒．取病毒悬液经磷钨酸(质量分数为2％，pH=6．8)负染，在透射电镜下直接观察病毒的形 太【7]． ，∞ 1．2．2