《基于自动磁珠转运的转基因蛋白Cry1Ab检测 Magnetic Beads Transfer Based Assay for Cry1 Ab Protein》.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 ChineseJournalof 1318--1322 2011年9月 AnalyticalChemistry DOI：10．3724／SP．J．1096．201I．01318 基于自动磁珠转运的转基因蛋白CrylAb检测 李冬阳 樊凯 吴坚‘ 应义斌 (浙江大学生物系统工程与食品科学学院，杭州310029) 摘要基于自动磁珠转运，建立了转基因蛋白CrylAb免疫检测的新方法。利用水热法制备了粒径约 400 11111的纳米磁球，并进行电镜表征，通过溶胶法对磁球表面进行氨基修饰，采用戊二醛偶联对磁珠实现抗 体包被。在核酸提取仪中进行酶联免疫反应，采用分光光度法进行检测。本方法对转基因蛋白CrylAb的检出 限低于l“啦，与商品化酶联免疫试剂盒相当。本方法节约人力、严格控制时间，同时，所需设备成本较低，有 望取代传统的手动检测技术。 关键词转基因作物；磁分离；CrylAb蛋白；磁珠转运；免疫检测 1 引 言 转基因作物(GMOs)因其先进的生物技术优势而发展迅速。在1996～2008年期间，种植面积增幅 高达74倍，每年的增长率超过9％fl】。虽然转基因作物有其独特的生物技术优势，但其对人和动物及环 境的风险尚未得到充分评估。如潜在的物种间基因流动、破坏生物多样性、增强害虫的抗药性和对人类 健康的威胁等因素，尚无法排除。因此，一些国家对转基因作物进行了立法，要求对含有转基因成分超 过1％的产品进行强制标识，该含量后被降至0．9％121。快速检测GMOs成分是这些法规能否有效实施 and 的关键。((AnalyticalBioanalyticalChemistry》期刊于2010年3月就GMOs检测分析技术出版了 专刊【31。 目前，检测转基因生物及其制品的技术可分为两大类：基于核酸的检测和基于蛋白质的检测121。核 酸检测是检测其插入的外源基因，以聚合酶链式反应(PCR)为主。PCR法灵敏度高，但操作复杂，对测 试人员有较高的技能要求闱；另外，它耗时长、成本高和难以实现高通量检测等也限制着其应用。蛋白 层面的检测以免疫分析最为成功，包括酶联免疫吸附试剂盒(ELISA kit)和金胶试纸等。ELISA对操作 的要求相对PCR要简单，但对操作人员的技能要求也很重要”】。试纸条操作简单，成本低廉，能较好地 实现现场检测，但难以用于定量分析。另外，免疫生物传感器等新兴技术也被用于蛋白检测[61。 生物磁珠因其优良的抗原捕捉能力而备受关注[71。利用磁珠转运可以方便地实现各种生化反应步 骤，而不需要复杂的流体控制系统。目前，磁珠转运应用于核酸提取和纯化的研究及装置较多，而除了 医院所使用的大型免疫磁分离发光检测系统需要复杂流路控制外，用于免疫分析的报道较少。利用磁 珠自动转运可以使操作流程更为标准化、统一化，同时降低操作劳动强度，对操作时间和条件的控制也 十分精准。本研究利用自制的免疫磁珠，结合现有的核酸提取仪，通过免疫磁珠转运实现了对转基因蛋 白CryIAb的检测。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 荡器(德国IKA公司)；M5多功能酶标仪(美国MD公司)；核酸提取仪(杭州博日公司)；单道和八道 统(美国Quantum Design公司)；实验用水通过去离子水机(美国Millipore公司)制备。 2010-1卜16收稿；2011-04-21接受 本文系国家科技专项(No．2009ZX08012-004B)资助 ‘E