tPA-PAI-1系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中表达.pdf

摘 要 为了初步了解组织型纤溶酶原激活剂 (tissue-plasminogen activator，tPA)、 1 型纤溶酶原激活剂抑制剂 (plasminogen activator inhibitor-1，PAI-1)和纤溶 酶原(plasminogen，PLG)在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟进程中的潜在作用；本 文运用实时定量 RT-PCR 技术分别检测体外成熟过程中不同时间段（0 h、8 h、16 h、 24 h）、添加不同浓度卵泡刺激素 (follicle-stimulating hormone，FSH)以及卵泡 刺 激 素 受 体 结 合 抑 制 剂 (follicle-stimulating hormone receptor-binding inhibitor，FRBI-10)成熟培养 16 h 后牛卵丘细胞和卵母细胞中 tPA、PAI-1 及 PLG 基因相对表达变化，观察添加不同浓度 FSH 成熟培养 16 h后卵丘细胞膨胀程度差异， 并统计卵母细胞第一极体排出情况。 1. 卵丘卵母细胞复合体在体外成熟过程中，卵丘细胞和卵母细胞 tPA mRNA 相 对表达量，于体外成熟 16 h 显著高于 0 h 和 8 h，24 h 达到最高 (P0.05)；而卵丘 细胞 PAI-1mRNA 相对表达量于 8 h 达到最高，显著高于 16 h 和 24 h(P0.05)。卵 丘细胞 PLG mRNA 相对表达量总体趋势和 tPA 类似，于 16 h 显著高于 0 h 和 8 h， 在 24 h 达到最高 (P0.05)。卵母细胞 PAI-1 mRNA 相对表达量于 16 h 显著高于 0 h 和 8 h，达到最高，并显著高于 24 h(P0.05)。 2. 在添加不同浓度 FSH (0、0.01、0.1 和 1 IU/mL)体外成熟 16 h 的各处理组， 卵丘细胞中 tPA mRNA 相对表达量随 FSH 添加浓度的升高而升高，当 FSH 添加浓度 1 IU/mL，卵丘细胞之间的缝隙连接较为松散且发暗。卵丘细胞中的 PAI-1 mRNA 相对 表达量在 0.01 IU/mLFSH 时高于其他各处理组；同时卵丘细胞 PLG mRNA 表达水平在 0.01 IU/mL FSH 时达到最低，于 0.1 IU/mL 和 1 IU/mL 时显著升高 (P 0.05)。卵 母细胞 tPA 表达变化显示出与第一极体排出率相似的趋势，即 0.01 IU/mL FSH 处理 组的 tPA mRNA 水平和第一极体排出率显著高于其他处理组 (P 0.05)。卵母细胞中 PAI-1 mRNA 相对表达量在 0.01 IU/mL FSH 时最高，显著高于其他各 FSH 添加组 (P 0.05)。 3. 在添加 FRBI-10 体外成熟 16 h 的各处理组，在只添加 FSH 组的卵丘细胞 tPA mRNA 相对表达量显著高于其他各处理组 (P 0.05)；卵母细胞中 tPA mRNA 相对表达 量在只添加 FSH 组显著高于空白组 (P 0.05)，在只添加 FSH 组，卵丘细胞和卵母细 胞中 PAI-1 mRNA 相对表达量最高，显著高于其他各处理组 (P 0.05)；卵丘细胞和 卵母细胞 PLG mRNA 相对表达量在只添加 FSH 组却显著低于空白组 (P0.05)。 综合以上研究结果，本研究认为：牛卵丘细胞中 tPA 与 PAI-1 基因的表达受 FSH 正向调节，而 PLG 基因表达却受到 FSH 的抑制；进而推测，tPA-PAI-1 系统对卵丘 细胞在体外成熟过程中的扩散并不起促进作用；在卵丘卵母细胞复合体体外成熟过 程中，tPA-PAI-1 系统可能参与对牛卵泡排卵过程的调控。同时，tPA 在卵母细胞中 的表达是否与其第一极体排出有关，需进一步实验验证。本实验结果为进一步研究 tPA-PAI-1 系统在牛卵丘卵母细胞复合体体外成熟过程中的具体作用奠定了基础。 关键词：tPA；牛；卵丘细胞；卵母细胞；FSH；FRBI-10 Expression of Tissue-Type Plasminogen Activator-Plasminogen Activator Inhibitor-1 System in Bovine Cumulus-Oocytes during in vitro Maturation A