《HaCaT细胞中FUT4表达与其启动子区甲基化的相关性分析》.pdfVIP

Hereditas (Beijing) 2015 年 1 月, 37(1): 48 ―54 研究报告 HaCaT 细胞中FUT4 表达与其启动子区甲基化的相关 性分析 1 1 2 李洪艳 ，佟少明 ，燕秋 1. 辽宁师范大学生命科学学院，大连 116081； 2. 大连医科大学基础医学院，生物化学与分子生物学教研室，大连 116044 摘要 : 岩藻糖基转移酶Ⅳ(Fucosyltransferase Ⅳ，FUT4)在正常细胞中表达量很低，但其低表达的调控机制以及 是否受其启动子甲基化调控并不十分清楚。文章采用Western blot 、免疫荧光和Real-time PCR 的方法检测正常 人永生化表皮细胞系HaCaT 细胞FUT4 的表达，观察DNA 甲基转移酶抑制剂5-aza-dC 处理对FUT4 表达的影 响。应用甲基化特异性PCR 方法分析HaCaT 细胞中FUT4 启动子甲基化状态。结果表明，HaCaT 细胞中FUT4 的表达水平明显低于人表皮鳞癌细胞A431 和SCC12。5 µmol/L 的5-aza-dC 处理72 h 的HaCaT 细胞，其FUT4 mRNA 水平明显升高，并且与未经 5-aza-dC 处理的对照组相比，U 引物扩增检测到的产物量增加，M 引物扩 增检测到的产物量明显减少。这些结果表明，HaCaT 细胞中FUT4 的低表达可能与其启动子区CpG 岛甲基化 有关。 关键词 : 岩藻糖基转移酶Ⅳ；低表达；甲基化；HaCaT 细胞 Correlation between FUT4 expression and its promoter methylation in HaCaT cells 1 1 2 Hongyan Li , Shaoming Tong , Qiu Yan 1. College of L ife Science, Liaoning Normal University, Dalian 116081, China; 2. Department of Biochemistry and Molecular Biology, Dalian Medical University, Dalian 116044, China Abstract: The expression level of fucosyltransferase Ⅳ (FUT4) is low in normal cells. The mechanism underlying regulation of FUT4 expression in normal cells remains elusive . In this study, Western blot, immunofluorescence and real-time PCR were used to analyze FUT4 expression in the immortalized human keratinocytes cells HaCaT. Methyl- ated-specific PCR was used to investigate methylation status of FUT4 promoter. The results showed that the FUT4 expression level was significantly lower in HaCaT cells than squamous carcinoma cells A431 and SCC12. FUT4 mRNA expression was increased in HaCaT cells treated by 5-aza-dC (5 µmol/L), an inhibitor of DNA methyltrans- ferase. Furthermore, using the primers to amplify the methylated fragment yiel