CRISPR基因编辑技术在肿瘤研究中的应用.pdfVIP

医药杂志2015年9月第27卷第9期M ：!： !：2：!： ：竺 ： · 论著 · CRISPR基因编辑技术在肿瘤研究中的应用 李君红 ，张富婷，桑春艳，王晓辉 ，惠 玲 [关键词] 基因，肿瘤 ；基因，修饰；核糖核酸酶类 ；综述 [中国图书资料分类号] R394．21 [文献标志码] A [文章编号] 2095—140X(2015)09-0095-05 [DOI] 10．3969／j．issn．2095—140X．2015．09．020 自2013年研究人员第一次展示成簇 的规律间 常会在细胞或动物模型中造成超出正常生理范围的 隔的短 回文重复序列 (clusteredregularlyinterspaced 基因过表达 ，这会导致细胞信号传导通路的异常，因 shortpalindromicrepeat，CRISPR)基 因编辑技术在 此不能正确反映特定基 因的正常作用 ，从而对该基 真核细胞基因编辑方面的巨大潜力之后 ，近几年在 因致癌或抑癌功效的解读产生误导。根据 目前肿瘤 生物研究的各领域产生了革命性影响。在肿瘤研究 全基因组测序的结果来看 ，大部分基 因突变在肿瘤 方面 ，从基础研究到临床研究，再到转化医学 的应 发生发展过程中并不起直接作用 ，只有少部分基 因 用 ，CRISPR基 因编辑技术均显示 出强大 的生命力 突变对肿瘤发生发展起决定作用。利用现有常规基 和广泛的应用前景。为此 ，本文对 CRISPR基 因编 因编辑技术对肿瘤细胞进行研究，很可能对其相关 辑技术在肿瘤研究方面的应用进行综述 ，以期为肿 基因突变造成误判 。④在体 内实验方面，研究人员 瘤研究者提供资料。 通常需要通过同源重组对小鼠胚胎干细胞进行基因 编辑 ，建立产生相应 的具有特异突变位点 的原癌基 1 常规基 因编辑技术在肿瘤研究中的应用及缺陷 因或抑癌基 因的转基 因小 鼠模型来进行研究 。 肿瘤发生过程通常是由基因或表观遗传学层面 这种技术还可结合 Cre和 Flp位点特异性重组酶来 造成原癌基 因的激活或抑癌基 因的失活 (或二者 皆 生成可控激活的等位基 因 。虽然此技术建立转 有)所造成 。原癌基 因可 由基因突变或表观遗传学 基因小鼠模型已经相当成熟，但我们必须看到依然 的去 甲基化而得到激活 ；而抑癌基因的失活则是 由 存在靶向目标基因效率低、胚胎干细胞操作复杂以 基 因突变或表观遗传学 甲基化而失去活性 。在 目前 及小 鼠饲养繁殖耗时费力等缺点。在转基因小鼠模 研究肿瘤发生相关基 因的作用时，研究人员通常需 型中激活某特定基因通常是通过同源重组插入相关 要使用 cDNA过表达和 RNA干扰 的方法从正反两 基因，而特异性失活某基 因则通过非同源末端连接。 方面研究特定基因的潜在致癌或抑癌作用 。 研究人员近来通过使用位点特异的内切酶如锌指核 虽然这些方法在肿瘤研究过程中取得 了丰硕成 酸酶 和转录激活子样效应 因子核酸酶 来进 果，但也必须意识到这些传统方法的一些缺陷：①在 行更为精确的基因组编辑 ，取得了很好的效果 ，但这 RNA干扰方面 ，由于 RNA片段本身 的不稳定性 ，研 种技术同样存在花费巨大且编辑手段复杂繁琐等 究人员通常无法精确确定 RNA干扰对 目的基 因的 缺点。 抑制程度 。②RNA干扰技术 由于 RNA片