抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体的制备和特性鉴定.pdf

摘 要 ‘‘ 本研究通过制备AFGl人工免疫抗原，免疫Balb／c小鼠获得了特异性较高的多克隆 抗体；进一步将小鼠脾细胞与SP2／0细胞融合，制得杂交瘤细胞，通过HAT培养基筛 选，获得三株阳性杂交瘤细胞；对三株细胞腹水单克隆抗体的特性进行鉴定，均具有较 强的特异性，为酶联免疫和免疫亲和技术检测黄曲霉毒素G1分量及总量奠定了基础。 主要的研究内容及结果如下： 1、建立了黄曲霉毒素G1人工抗原合成方法。分别采用肟化法和环氧化物法两种 以及小鼠抗血清的制备等方法确证两相体系环氧化物法成功合成了AFGl．BSA偶联物， 2、优化了融合细胞的培养方法，改善了杂交瘤细胞的存活率。通过对不同批次胎 牛血清、不同来源SP2／O细胞、传统液体培养与自制半固体培养基培养进行比较，以及 生长因子、13一巯基乙醇的添加，摆脱了对饲养细胞的依赖，优化了细胞培养条件。结 使用能够较好的提高细胞融合率和阳性率，而半固体培养基的采用则有效的缩短了培养 周期，利于阳性细胞的存活。 3、采用优化的细胞培养条件进行新融合细胞的培养，间接非竞争性ELISA初筛 和间接竞争性ELISA终筛相结合，最终从672株细胞中得