大鼠BMSCs保护大鼠卵巢颗粒细胞的实验的研究.pdf

大鼠BMSCs保护大鼠卵巢颗粒细胞的实验研究 中 文 摘 要 目的：探讨大鼠BMSCs体内、外保护大鼠卵巢颗粒细胞的情况。 方法：从 SD 大鼠骨髓中提取 MSCs，经体外扩增、纯化并进行鉴定。体外实验，采 用3周龄左右的雌性SD大鼠，皮下注射60单位的孕马血清，48小时后无菌条件下 取出双侧卵巢，用皮试针针头在体视镜下刺破各卵泡，冲出颗粒细胞。颗粒细胞在 体外扩增、纯化并进行鉴定。用MTT法得出顺铂对颗粒细胞的半抑制浓度及最佳干 预时间。采用半抑制浓度的30%即5mg/l作为实验的干预浓度，干预时间为72h。体 外实验分为：G0组 颗粒细胞；G5组 颗粒细胞+5mg/l顺铂；GM5组 颗粒细胞+5mg/l 顺铂+BMSCs. GM5组采用Millicell 共培养小室把颗粒细胞和BMSCs分上下两层进 行共培养，BMSCs 分泌的细胞因子可以自由通过。实验各组干预 72h 后，通过流式 细胞术检测各组颗粒细胞的凋亡率，RT-PCR技术检测各组颗粒细胞凋亡相关基因的 表达情况。体内实验分为四组：空白组、MSCs组、雌激素组、青年组。前三组采用 9~10月龄的SD雌性大鼠各15只，青年组采用15只3~4月龄的SD雌性大鼠。通过 阴道脱离细胞监测前三组围绝经模型鼠进入围绝经后，空白组通过尾静脉输注 2ml 的生理盐水，一周后重复注射等量生理盐水；MSCs 组经尾静脉输注 2ml 含 1~2×106MSCs，一周后注射相同剂量细胞悬液；雌激素组灌用生理盐水溶解的尼尔雌 醇，按0.158mg/(kg.d)灌胃给药，连续给药8w；青年组采用3月龄左右的SD大鼠 经尾静脉注射2ml的生理盐水，一周后重复注射等量生理盐水。实验各组干预后第 一、三个月，分别处死各组SD大鼠，取左侧卵巢经固定、切片做TUNEL凋亡染色， 在显微镜下统计颗粒细胞的凋亡率。 结果：体外实验结果显示：G0、G5、GM5各组凋亡率分别为0.59%、13.04%、4.84%。 凋亡相关基因表达情况分别为：Survivn GOGM5G5；P21 G5GOGM5；Cmy-c G0GM5G5；Bax G5GOGM5；Bcl-2 G0GM5G5。体内实验结果显示在干预一个月后 实验各组卵巢颗粒细胞的凋亡率分别为：空白组9.90±3.23%、MSC组6.10±2.63% （P=0.075）、雌激素组6.60±3.13%（P=0.139）、青年组1.53±1.44%（P=0.001）； 干预三个月后实验各组卵巢颗粒细胞的凋亡率分别为：空白组14.60±3.51%、BMSC 6 组8.29±3.35%（P=0.02）、雌激素组10.53±2.29%（P=0.062）、青年组3.56±1.44% （P0.001）（P为实验组与空白组卵巢颗粒细胞凋亡率统计值，P0.05差异有统计 学意义）。 结论：大鼠 BMSCs在体内可以保护围绝经大鼠的卵巢颗粒细胞，减少其凋亡；在体 外BMSCs可以保护顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞的凋亡。 关键词：BMSCs、颗粒细胞、凋亡、卵巢、大鼠、围绝经期. 7 Rat BMSCs protect rat ovarian granulose cell in vivo and vitro Abstract Objective: The purpose of this study was to explore the function that BMSCs protect rat ovarian granulose cells in vivo and vitro. Methods: BMSCs were isolated from rats.Later,the BMSCs were cultured,purified and identified. 60 IU serum gonadotrophin was injected subcutaneously into 3-week-old f