应用特殊设计的寡核苷酸链纠正点突变的初步的研究.pdf

应用特殊设计的痹核甘睦链纠正点突变的初步研究 中文摘婪 中文摘要 目的：应用特殊设计的寡核苷酸链纠正点突变这一技术是近年发展起来的一 项分子生物学新技术，应用该技术能在基因组碱基序列中任意位点纠正或引入一 个指定的碱基。较之传统的基因重组技术，该技术对基因组本身的结构几乎没有 任何影响，且不会产生因病毒载体和质粒载体引起的免疫反应以及随机整合。一 些遗传性疾病，如乙型血友病，有部分是由于Ⅸ因子核苷酸序列中特定位点点突 变引起的。本研究旨在建立应用特殊设计的寡核苷酸链纠正点突变这一新技术的 体内外研究方法，探讨影响寡核苷酸链的细胞核内转染率以及突变纠正率的因素， 并将该技术初步应用于诱导大鼠肝细胞Ⅸ因子突变，为今后将该技术应用于血友 病等由基因点突变而引起的疾病的基因治疗提供实验依据。 方法：本研究分为三部分，第一部分为寡核苷酸链的化学载体合成。通过减 少孵育时间，以还原胺化法制备