抗肝损伤与肝纤维化药实验法.pptVIP

肝脏是人体最大的腺体，位于腹腔的右上方。分左叶、右叶、方叶及尾状叶四个叶。 肝脏功能 代谢功能 (合成多种蛋白质和脂类) 胆汁分泌（有助脂肪的消化和吸收)） 解毒功能 防御功能 参与凝血及抗凝血 造血功能（胚胎时期) 肝脏的细胞:实质细胞(肝细胞)及非实质细胞(肝星状细胞\枯否细胞\pit细胞\窦内皮细胞 ) Pit细胞－大颗粒淋巴细胞-位于肝血窦内的Nk细胞。 1. 四氯化碳肝损伤动物模型 【原理】 1)CCL4对肝细胞膜直接溶解作用。 2) 活性代谢产物对肝细胞的损伤。CCL4在肝细胞内质网中经细胞色素P450酶的代谢，生成活泼的三氯甲基和氯自由基。 ①与细胞内和细胞膜的大分子发生共价结合，膜脂质过氧化，膜的结构和功能完整性被破坏； ②抑制细胞膜及线粒体膜上钙泵的活性, 胞浆[Ca2+]升高，Ca2+-ATP酶激活, ATP耗竭导致肝细胞损伤坏死。 动物：以大鼠使用最多，雌雄兼用，280g左右。 方法： 大鼠一般以CCL4原液1 ml／kg体重一次性ip或sc注射。也可经ig给药，0.8-1.6ml／kg，配成1:1～1:3橄榄油或精制花生油稀释后ig。 小鼠对CCL4亦较敏感，配成1％橄榄油或精制花生油稀释液，按10-20ml／kg ig或ip注射。 观察指标： 1.给CCL4后16-24h处死动物，测定血清ALT和AST（↑）变化，甘油三酯(GT ↑)、乳酸脱氢酶(LDH ↑)、总胆酸(TBARS ↑)及肝指数升高, 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px↓)（检测试剂盒）。 2.肝病理形态学检查。 【注意事项和评价】 (1)此模型是一种经典的实验性肝损伤模型。形态学上主要表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性，转氨酶ALT和AST升高，并能灵敏地反映肝损伤的程度。ALT和AST 16-24h后达到高峰，升高十倍左右，90h后可恢复到正常范围。 （2）可先给药物7-10天，以评价药物对肝损伤的保护。 (3) CCL4可由呼吸道、皮肤吸收，对人体有一定的毒性，注意个人防护。 2.急性氨基半乳糖肝损伤动物模型 【基本原理】 氨基半乳糖(Galactoamine，GalN) ，常用其盐酸盐，生理盐水溶解。 机制：GalN属间接肝毒剂，肝损伤与其在肝内的代谢及随后对核酸合成的影响有关。GalN引起肝细胞坏死。分为三个步骤：第一步，GalN在肝内代谢引起VDP-葡萄糖胺的聚积，同时引起尿嘧啶核苷酸和UTP（尿苷三磷酸）缺乏；第二步，这些代谢异常引起肝细胞膜损伤；第三步，钙离子内流增加破坏细胞内钙稳态，进而引起代谢紊乱，导致细胞的死亡。 (1)动物：大鼠，250～350g，雌雄兼用。 (2)方法：将GalN以无菌生理盐水配成10％溶液，1 mol/L NaOH调pH至7.0，ip一次性注射500-850mg／kg（大于1000mg／kg，引起广泛性肝坏死）。 (3)检测指标：给药16-24h处死动物，测定血清ALT （↑）和AST（↑）， GT ( ↑)、 LDH ( ↑)、TBARS (↑)及肝指数(↑) 。 肝病理形态学检查。 【评价】 (1) 小鼠不敏感。 (2) GalN与CCl4所致肝损伤的组织学变化显然不同。GalN损伤则呈弥漫性的多发性片状坏死，脂肪变性不如CCl4明显，嗜酸性小体较多见，与病毒性肝炎所造成的损伤类似。GalN肝毒性的专一性较佳，对人安全无毒。 GalN肝损伤模型是研究病毒性肝炎的发病机制及其药物治疗的较好模型。 3急性对乙酰氨基酚肝损伤动物模型 【基本原理】 1.大剂量对乙酰氨基酚代谢中产生大量N-乙酰-对苯醌亚胺(NAPQI)，超过了GSH的解毒能力，未被清除的NAPQ I与生物大分子共价结合，导致蛋白质巯基被氧化和芳基化而影响功能。 2.对乙酰氨基酚在肝内代谢过程中产生自由基可引起肝细胞膜脂质过氧化，并通过破坏钙稳态而产生细胞毒性。 【操作步骤】 (1)动物：昆明小鼠，雄性，25～35g。 (2)方法：将对乙酰氨基酚溶于40％无菌生理盐水，一次性ip注射300-500m g/kg，24h后取血。 (3)观察指标： 血清ALT和AST测定。 肝作组织学检查。 【评价】 (1)对乙酰氨基酚（扑热息痛），乙酰氨基酚肝损伤是研究药物性肝损伤的常用动物模型。 (2)对乙酰氨基酚肝损伤的组织学变化主要表现以中央静脉为中心的圆盘状大量细胞坏死，但出血和脂肪变性不如CCL4肝损伤明显。 （3）大鼠对对乙酰氨基酚不敏感，小鼠十分敏感。 4.急性乙醇性肝损伤动物模型 【基本原理】 1.大量饮酒除经醇脱氢酶(ADH)氧