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毛细管区带电泳Capillary Zone electrophoresis CZE is also called free solution capillary electrophoresis （自由溶液电泳）. CZE应用缓冲溶液。主要用于分离离子溶质，不能分离中性化合物。 CZE主要以溶质的电荷/体积比的不同，因而迁移速度不同进行分离。 μEP = q/6?? r q - the charge of the ionized solute, ?- the buffer viscosity, r – the solute radius, μOBS = μEP +μEOF 一.外加电压时对分离的影响 高电压对柱效、分离度有利，但容易引起焦耳热的增加。 柱尺寸及材料的选择 柱尺寸： 常用柱内径为50、75 mm, 孔径小，表面积/体积比越大，散热效果好，但样品负载量小，检测困难。 柱材料： 玻璃柱对紫外光有吸收，聚四氟乙烯柱的Zeta电势约为二氧化硅柱的1/2，散热差，对短波长紫外光有吸收。 三. 缓冲溶液的选择 缓冲溶液的类型、浓度、pH值对于分离效率，选择性及分离度有重要作用。 CEZ对缓冲溶液的一般要求 1．? 在所选的pH范围内有足够的缓冲容量 2．? 在高浓度时产生电流小 3．? 缓冲溶液的淌度接近样品溶质的淌度 ? 缓冲溶液的离子浓度对分离的影响 1．对柱效的影响: N = (μEP+μEOF)V/2D (V-电压，D-溶质扩散系数） 离子浓度影响μEOF，在控温情况下，离子浓度增加， μEOF减小 缓冲溶液的离子浓度对分离的影响 2. 对分离度R的影响：浓度增加，EOF下降, 分离度R增加 3．对分析时间和选择性的影响：浓度增加， EOF下降，tm增加，分离选择性变好 缓冲溶液pH的影响 缓冲溶液pH从以下两方面影响CE 1. 对EOF的影响 2 .对样品荷电状态的影响 缓冲溶液添加剂 添加剂的作用 ??? 控制EOF方向和大小，增强选择性，提高分 离度 ??? 抑制管壁吸附 ??? 增加疏水溶质的溶解度，扩大分离对象??? ??? 增加溶液粘度，优化分离条件 添加剂种类 1. 表面活性剂，如季铵盐等 2. 有机溶剂 3.?两性离子，如三甲铵基甲内盐等或金属盐，如 k2SO4等，减少管壁吸附或稳定蛋白构像  5.? 手性试剂 加入手性试剂后，由于对映体与手性试剂的配合常数不同，以不同状态存在，迁移速度不同。 毛细管温度对CZE的影响 1．?柱温对EOF的影响 2．?柱温对分析时间的影响 柱温对样品注入量的影响 Vinj=(? P?r4 tinj)8?L (? P为两端压差） (1). Raising temperature can decrease the viscosity, ?vEOF increase.?(2). Raising temperature can decrease the dielectric constant, ?vEOF decrease.Because the change of dielectric constant is less than that of the viscosity, the overall effect is : raising the temperature increase vEOF. 4．?柱温对溶质的影响 a.对生物分子结构及特性的影响 b. 对溶质化学平衡的影响 c.对缓冲溶液pH值的影响 vEOF = ??E/4??? = 4?de /? * * * * 1．? 浓度变化引起粘度、溶质扩散、Zeta电位的变化，影响比较复杂，需要根据实际情况进行测定