欧文氏菌类胡萝卜素合成相关基因遗传转化水稻的初步的研究.pdfVIP

摘要 saliva 水稻(OryzaL)是世界上最重要的粮食作物之一，水稻的稳定高产是我 国粮食安全的重要保障。然而，水稻生长期间经常遭受自然界多种多样的逆境胁迫 伤害，由此而造成的活性氧增多会引发细胞氧化伤害，最终导致水稻大量减产，并 严重影响水稻的品质。提高水稻产量，改善水稻品质是水稻育种方面重要的研究内 容，人们通过植物基因工程将抗氧化的基因导入水稻基因组，期望获得高产稳产的 优良品种。 类胡萝卜素(carotenoid)是植物和微生物光合膜的组成部允，可保护光合系统 免受强光氧化破坏。许多类胡萝卜素是维生素A的重要来源，又是强抗氧化剂。欧 文氏菌(Erwinia uredovora)作为一种微生物，拥有比植物简单而且节能的类胡萝卜 索合成途径。而其中crtB，crtl，crtY是9．胡萝卜素合成过程中几个关键的酶。 欧文氏菌中类胡萝卜素合成途径中三个关键基因crtB，crtl，crtY；再用绿色组织特 301中构建三个绿色组织特异性转基因载 的表达。将表达盒导入双元转化载体pCl 过基因枪介导的遗传转化法将三个重组质粒共转化水稻品种粳稻中花ll，获得转基 因植株20株。之后对转基因愈伤组织、根及种子的GUS报告基因活性进行鉴定， 鉴定阳性率达80％，初步证明转基因成功；成苗后对转基因To代植株叶片提取DNA， 进行PCR鉴定进一步证明crtB、crtl,crtY基因转化水稻获得成功。 分离获得抗原并免疫新西兰白兔制备了criB，crtl，crtY抗体；经Westernblot检测， III 抗体血清以梯度稀释至107倍时依然可以与抗原杂交获得清晰、明显的条带，证明 获得的抗体血清，特异性好，效价高达到l为进一步鉴定转基因水稻 中caB，crtI，crtY蛋白的表达做好准备。 本研究通过转基因技术过量表达crtB,crtLcrt堪因初步获得稳定的转基因水 稻株系，还需要进一步进行转基因植株的抗氧化实验，验证其抗氧化能力，为最终 阐明类胡萝卜素在水稻绿色组织中抗氧化机理、创造出抗氧化胁迫水稻新种质提供 了一定的证据。 关键词：水稻， B一胡萝卜素，crtB，crtI．crtI：,抗氧化，转基因 IV Abstract oneof Rice(Oryzasativa￡)isthemost importantinthe crops and WOrId．high stable ofdee grainyield is valuable forour very nationalfood security．HoweVer．rice oftensuffers froma ofstressful variety conditions itsgr0、vth锄d during abiotic development·Thestresseswhich increasethe reactive incells oxygenspecies a