蛋白质分离纯化与检测技术.ppt

蛋白质分离纯化与检测技术 自动分布收集器 凝胶过滤层析示意图 凝胶过滤层析示意图 凝胶的结构与性能 葡聚糖凝胶特点 阳离子交换基 阴离子交换基 原理 亲和层析过程： 分配层析 柱层析 纸层析 薄层层析 聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺（Acr）和交联剂亚甲双丙烯酰胺(Bis) 在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(简称AP)或核黄素(C17H20O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。凝胶聚合时所形成的微孔影响了不同分子的迁移率，当施加一定电压时小分子的物质的迁移速率将快于大分子的物质，即所谓的分子筛效应。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 在电泳中，蛋白样品与上样缓冲液混合变性，上样缓冲液中含有SDS和巯基乙醇使得蛋白质分子中的二硫键还原，氢键、疏水键打开，SDS按1.4g SDS/1g蛋白质的比例结合到蛋白质多肽链分子上，形成SDS-多肽复合物。由于十二烷基磺酸根带负电，SDS覆盖于蛋白质的表面，破坏了蛋白质分子的四级结构而使多肽复合物具有近似的形状（长椭圆棒状），并且复合物所带有的负电荷大大超过了多肽分子原有的电荷量，因而掩盖了多肽分子原有的电荷差别。 聚丙烯酰胺凝胶电泳原理 如图所示，蛋白质所带的电性主要取决于氨基酸R集团所带的电性。图中的H代表无极性的R集团为了躲避水而聚集于内部。 当SDS结合到蛋白质多肽链分子上，形成SDS-多肽复合