二价核酶基因构建及对PLRV负链靶序列的体外切割研究.pdfVIP

‘ C T ^ IIIIRIC6LTURAE 华北农学报 ·2012，27(2)：12．18 BOREllLI-SiHigl 二价核酶基 因构建及对 PLRV负链靶序列 的体外切割研究 张剑峰 ，张鹤龄 ，于嘉林。，迟胜起 ，贺秀芳 ，郝文胜 ，杨静华 (1．青岛农业大学 农学与植保学院，山东 青 岛 266109；2．内蒙古大学 生命科学院， 内蒙古 呼和浩特 010021；3．中国农业大学 农业生物技术国家重点实验室 ，北京 100094) 摘要 ：根据锤头状核酶的作用模式，设计 、合成并克隆了特异性切割马铃薯卷叶病毒(Potatoleafrollvirus，PLRV) 中国分离株 (PLRV-ch)复制酶基 因负链 RNA的二价核酶序列。将该核酶基 因克隆到 pGEM-4Z中，构建成体外转录 载体 pGEM-4ZDR；同时将包含核酶切割识别位点的PLRV．Ch复制酶基 因cDNA近 5端 的874bp片段反 向插入到 pGEM-4Z中，构建 了体外转录载体 pGEM-4ZR5。以线性化的重组质粒 pGEM-4ZDR和 pGEM-4