不同茶树品种氮效率的差异和硝酸还原酶基因的克隆和表达分析.pdf

JIIIII I IIIIIIIlll l IIIIIIIJ 摘要 茶树是我国重要的经济作物，施用化肥是提高茶树经济产量最直接的方式。然而 随着氮肥的大量施用，茶树对于氮素的吸收利用效率却在不断。卜I降，出现了环境污染、 生态条件恶化等问题，长此以往，则与+口J．持续发展的理念相悖。若要从根本上解决这 个问题，则需要以遗传学为出发点，研究茶树氮代谢调控网络，从而为筛选出氮高效 利用的基因型，进一步选育出耐低氮胁迫的茶树新品种提供一定的理论参考，从而减 少氮肥的施用量，提高茶树对氮肥的吸收利用效率。 本研究在春茶期间选取安徽省东至茶树良种繁殖示范场种质圃中25个茶树品种 表达水平进行了分析。结果表明品种间表达水平差异明显，且这三种基因的表达水平 早现出相一致的规律，推测茶树不同品种间氮吸收利用能力存在差异，NR、GS、 GOGAT这三种基因在氮代谢网络调控中有密切的联系。 基于以上研究结果，对硝酸还原酶(NR)一植物氮代谢过程中起关键作用的限速 酶作了进一步的研究。利用茶树全器官转录组文库中NR的EST序列，通过RACE 茶树NR蛋白属于亲水性蛋白，可能为胞质蛋白，不存在跨膜结构。通过对NR基因 的上游调控序列相关分析，发现该基因中含有碳代谢基因调控元件以及多个与植物生 长密切相关的组织特异表达顺式作用元件。 选取“舒茶早”、“凫早2号”、“龙井43”三个茶树品种为实验材料，设置不同氮 素的浓度进行水培处理，利用qRT-PCR对茶树不同组织NR基因的表达水平进行分 析，并检测氮胁迫条件下茶树叶片可溶性蛋白和可溶性糖含量的变化情况。结果表明， NR基因具有组织特异性且主要分布在茶树根部中，随着氮胁迫时间的延长，第3天 时根部的NR基因表达量迅速上升，表达量为对照的1．75．15．06倍，7天之后基本处 于卜-调状态，可溶性蛋白含量随着氮胁迫时间的延长出现不同程度的下降，而可溶性 糖含量则先增加后降低。 关键词：茶树耐低氮硝酸还原酶基凶克隆实时荧光定量PCR 万方数据 Abstract in themost economic China，the oneof Tea(Camelliasinensis)is important plants theecomomicof fertilizeristhemostimmediatetoraise ofchemical way yeild application chemicalfertilizerwas N tea andmore using，however,the plants．Atpresent，more levelwas toenvironmental of application decreasing，leading pollution，aggravation settlethis metabolism fundamentally,thenitrogen