膀胱癌抑癌基因Apaf-1和APC基因启动子甲基化的临床和基础的研究.pdf

qLh人学博?I：论文膀胱癌抑癌基因Apaf-I和APC基冈启动子甲基化的临床与基础研究 甲基化的临床与基础研究 研究生：潘俊 导师： 陈凌武教授 中山大学附属第一医院泌尿外科 中文摘要 膀胱癌足我国泌尿系统最常见的恶性肿瘤。世界范围内，膀胱癌发病率居恶 性肿瘤的第九位，在男性排名第六位，女性排在第十位之后，其中超过90％的膀 胱癌为尿路上皮癌(uc)，具有易复发和进展的特点。 膀胱癌发病的具体分子机制目前尚不明确，与其他恶性肿瘤一样，膀胱癌的 发生是多基因、多阶段变异累积形成的病理过程，也是一个涉及多基因、多信号 通路参与的复杂过程。目前膀胱癌发病、复发和进展的分子机制仍然是泌尿外科 的研究热点。表观遗传学机制在肿瘤中具有重要作用，其中抑癌基因启动子甲基 化可引起染色体结构和稳定性的改变，导致基因表达失活，参与肿瘤的发生和发 展。研究发现抑癌基因的异常甲基化不是随机出现的，其具有基因特异性和肿瘤 特异性，已在膀胱癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤患者的组织和血液、尿液等体 液中发现多种抑癌基因的异常甲基化，同时其甲基化同肿瘤的分期和分化及预后 相关，并可能成为肿瘤特异性的分子标记物。另外基因启动子甲基化改变不涉及 DNA序列的改变，是可逆的，可被DNA甲基转移酶抑制剂逆转，恢复抑癌基因 的表达，通过诱导肿瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制细胞的增值，可能成为肿瘤治疗 的新途径。因此，研究膀胱癌中抑癌基因的甲基化对理解膀胱癌的发病机制、建 立新的肿瘤标记物以及预后分析和治疗均具有重要意义。 组蛋白乙酰化修饰也是表观遗传调控主要的研究内容之一，其通过改变染 I 中山大学博士论文膀胱癌抑癌基冈Apafol和APC基冈启动子甲基化的临床与基础研究 色质的构型调控基因转录，组蛋白乙酰化促进基因转录，去乙酰化抑制基因转录。 目前研究发现DNA甲基化同组蛋白乙酰化具有密切关系，组蛋白去乙酰化是 DNA甲基化抑制基因转录的重要下游机制之一。组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA 可增强表观抑制的抑癌基因的表达，抑制细胞增殖，在肿瘤的表观遗传学治疗中 具有重要意义。 凋亡蛋白酶活化因子-l基因(Apoptosisproteaseactivatingfactor-1，Apaf-i) 和腺瘤性结肠息肉病基因(adenomatouscoli，APC)是两种重要的抑癌 polyposis 基因，分别在线粒体凋亡途径和Wnt信号传导通路调控中发挥着重要作用，而 膀胱癌中Apaf-I、APC基因表观遗传学调控机制的研究报道较少。本研究通过 甲基化特异性PCR方法检测膀胱移行细胞癌组织中Apaf-I和APC的启动子甲 基化状态，分析两种抑癌基因的启动子甲基化状态与膀胱癌临床特点及复发的关 系，并检测人膀胱癌T24细胞株中Apaf-I基因启动子的甲基化状态，并应用不 基因的表达情况，鉴于组蛋白乙酰化调节与启动子甲基化的重要关系，本研究进 一步应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatin A，TSA)体外作用于 人膀胱癌T24细胞株，观察其细胞生物学行为改变和Apaf-I、APC表达的变化。 本研究为探讨膀胱癌发生、发展的机制和建立临床早期诊断和预后的标记物提供 实验依据，并为膀胱癌的表观遗传学治疗提供新的靶点。 第一部分膀胱癌抑癌基[困Apaf-1和APC的甲基化状况 及其临床意义 目的：研究抑癌基因细胞凋亡蛋白酶活化因子．1(Apaf-1)和腺瘤性结肠息肉 病基因(APC)的启动子甲基化状况与膀胱癌临床病理的关系及对患者复发的影 响。 启动子甲基化状态，以15例正常膀胱黏膜组织为对照组。 结果：Apaf-1和APC基因在膀胱癌组织中的甲基化率为90．0％和82．7％，在正 II 中山大学博=l：论文膀胱癌抑癌基因Apaf-I和APC基因启动子甲基化的临床与基础研究 常膀胱组织为6．77％和20．0％，差异分别有统计学意义(尸均=o