第6章 抗原抗体反应.pptVIP

抗原可诱导机体的免疫应答，产生相应的抗体（免疫原性） 并与抗原反应（反应性）。 抗原免疫动物，获得的血清称为抗血清。 抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由一种抗原决定簇刺激一个B淋巴细胞，使它成为能分泌特定抗体的浆细胞，浆细胞克隆，产生的单一抗体称之为单克隆抗体。 多个抗原决定簇刺激不同B细胞克隆产生的抗体，称为多克隆抗体。 第一节：抗体的制备与应用 一、抗血清的制备 ?1、免疫动物： 选择合适的动物进行免疫极为重要。选择时应考虑以下几个因素： 抗原与免疫动物的种属差异越远越好；亲缘关系太近不易产生抗体应答（如兔－大鼠之间，鸡－鸭之间）。 抗血清量的需要：大动物如马、骡等可获得大量血清（一头成年马反复采血可获得10000ml以上的抗血清）；但有时抗体需要不多，选用家兔或豚鼠即可。  初次应答再次应答注意时间间隔，2到4周比较适合大多数动物。 2、抗血清的纯化与保存 免疫动物的抗原可用病毒、细菌和其它微生物。半抗原与载体蛋白发生偶连 纯化的目的是尽量去除抗血清中与目的抗体不相关的成分，防止与特定抗原反应时起干扰作用。 常用饱和硫酸铵盐析法，不同分子量蛋白质 能在不同盐浓度沉淀。 3、抗血清的鉴定和保存 抗血清的鉴定 　　动物血采集后，立即分离出血清，此抗血清在保存或应用前，必须作效价和特异性鉴定。 　（一）双向免疫扩散法鉴定抗体的特异性 　　按双向免疫扩散技术打两排孔，上排放抗原粗提物（如抗原来自动物血清则放相应的混合血清）和纯化抗原，下排加抗血清，进行双扩散18～24h后，仔细观察上下两排孔之间出现的沉淀线。若粗抗原及纯抗原之间皆出现一条沉淀线，且两者互相融合，则证明该动物已产生单价特异性抗体（方法验证的意义）。 　 双向免疫扩散法测定抗血清效价 　　测定抗血清效价有两种稀释方法：一是稀释抗血清，如1/2、1/4、1/8、1/16对倍稀释，分别与一个浓度的纯抗原反应；另一是稀释抗原，即把抗原作对倍稀释或按浓度（如mg/ml）进行稀释，分别与不同浓度的抗血清进行双扩散试验（称为棋盘滴定）。 抗血清的保存 　　抗血清保存有三种方法。第一种是4℃保存，将抗血清清除菌后，液体状态保存于普通冰箱，可以存放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。如若加入甘油则保存期可延长。第二种方法是低温保存，放在－20～－40度，一般保存5年效价不会有明显下降，但应防止反复冻融，反复冻融几次则效价明显降低。因此低温保存应用小包装，以备取出后在短期内用完。 二、单克隆抗体McAb)的制备 　　单克隆抗体的理化性状高度均一，生物活性单一，与抗原结合的特异性强，便于人为处理和质量控制，并且来源容易，所以一问世便受到欢迎和重视。在医学领域中，McAb在诊断疾病、防治疾病以及疾病机制研究等方面起着巨大的促进作用。 1、杂交瘤技术的基本原理 　　杂交瘤抗体技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫的脾淋巴细胞，小鼠骨髓瘤细胞。 脾淋巴细胞的主要特征是它的抗体分泌功能和能够在选择培养基中生长，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即所谓永生性。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。 2、制备单克隆抗体的基本技术 制备单克隆抗体 是复杂而费时的 工作，整个技术 流程如图7-2。 3、人工克隆抗体的制备 用人肿瘤细胞株与人的外周血B淋巴细胞融合获得人源单克隆抗体。 EBC（疱疹病毒颗粒）感染人体B细胞，部分基因插入人体B细胞，形成新的B细胞比较稳定，抗体分泌能力也较强。 抗体工程是指利用重组DNA和蛋白质工程技术，对抗体基因进行加工改造和重新装配，表达抗体分子，或用细胞融合、化学修饰等方法改造抗体分子的工程。这些经抗体工程手段改造的抗体分子是按人类设计所重新组装的新型抗体分子，可保留（或增加）天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除（或减少或替代）无关结构，因此比天然抗体更具有潜在的应用前景。 三、抗体工程 四、催化性抗体 有催化活性的抗体称为催化性抗体 五、抗体在抗肿瘤治疗中的作用 淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤,可分为霍奇金病（简称HD）和非霍奇金淋巴瘤（简称NHL）两大类, 霍奇金病 多见于青年,儿童少见,首见症状常是无痛性的颈部或锁骨上的淋巴结肿大（ 占60％~80％）,左多于右,其次为腋下淋巴结肿大,肿大的淋巴结可以活动,也可互相粘连,融合成块,触诊有软骨样感觉,如果淋巴结压迫神经,可引起疼痛,少数