超量表达谷氨酰胺合成酶、硝酸根转运蛋白与铵离子转运蛋白家族1基因对水稻氮代谢的功能的分析.pdf

摘要 目前，随着社会工业化进程的愈演愈烈，我国的耕地面积越来越少，为了满足 人们的粮食需求，通过施用化学肥料特别是氮肥来提高粮食产量已经成为我国农业 生产的主要手段之一。然而，随着大量氮肥的投入，提高农作物经济产量的效益却 越来越低，而且伴随着水资源的大面积污染。水稻是我国以及全球最重要的粮食作 物之一，随着近年来分子生物学技术的飞速发展，对水稻氮代谢相关基因进行研究 并培育对氮高效吸收和利用的转基因水稻新品种将为我国水稻生产甚至是整个农业 发展起着十分重要的意义。本研究以获得对氮高效吸收和利用的转基因水稻新品种 为目标，通过超量表达水稻氮代谢相关基因，包括：谷氨酰胺合成酶基N(GS)、硝 酸根转运蛋白基因(NRT)和铵离子转运蛋白基因似肘乃，对转基因植株进行了详细系 统的分子生物学和生理生化研究。主要结果如下： 1．使用生物信息学方法在NCBI数据库搜索获得水稻氮代谢相关基因GSl；1、 通过eDNA文库和PCR扩增，分离克隆到上述基因完整的编码序列。以载体 表达量的检测，来获得超量表达的单拷贝转基因植株。 2．超量表达跚jJ、GSl；2和glnA的转基因植株，其生长表型没有明显差异， 生物产量也没有显著提高；但是生理生化指标的测定结果表明，转基因植株与野生 型植株相比表现为更高的代谢水平，包括：GS活性、水溶性蛋白含量、游离N03。 和N-H4+、游离氨基酸含量、总氮和总氨基酸含量；其单株经济产量和籽粒氨基酸含 量却比野生型植株显著降低(P0．05)。非生物胁迫试验结果表明，超量表达GSl；2 的转基因植株对Basta表现为明显的抗性，而且对高浓度NaCI、冷和干旱胁迫条件 均表现为更加敏感；超量表达glnA的转基因植株对高浓度NaCI胁迫条件也表现为 敏感，对其它胁迫条件均没有明显的生长差异；而超量表达鲫jJ『的转基因植株对 所试验的胁迫条件均没有生长差异。 3．超量表达GS2的转基因植株，在后代出现黄化分离的生长表型，黄化植株生 长受到抑制，叶片黄化、分蘖少、生物产量低、结实少，但是仍然能够完成整个生 VIII 育期的生长。生理生化指标的测定结果表明，黄化转基因植株的GS活性、水溶性 蛋白和游离NH4+含量显著降低(Po．05)，单个游离氨基酸产生明显的变化，但是游 离氨基酸总含量却维持在稳定水平，与野生型植株相比没有显著差异。超量表达GS2 的转基因植株，其黄化分离的现象不受到基因型的遗传，而是由于GS2基因的共抑 制引起的；叶片黄化只出现在2叶期之后，在成熟植株中只有项端幼嫩叶片黄化， 而底部老叶片保持绿色；此黄化现象能够被体外添加Gin培养而恢复。 野生型植株相比均没有显著差异，但是在超量表达NRT的转基因家系中发现一个 T-DNA插入突变体，表现为根卷曲的生长表型，而地上部没有明显变化，生物产量 与野生型植株相比也没有明显差异。超量表达彳胛，j，的转基因植株与野生型植株 相比，其生长瘦弱，株高和鲜重均降低；对其游离NI--14+含量的测定结果表明，地上 因表达量没有显著变化。 为生长更具优势，生物产量提高的生长表型，但是在一定程度上确实提高了对氮的 吸收和利用，表现为相对高的代谢水平。当然，还有很大一部分工作，特别是超量 研究和测定，来证实其对氮代谢水平的影响。 关键词：水稻；氮代谢：氮高效吸收和利用；超量表达；非生物胁迫：谷氨酰胺合 成酶：硝酸根转运蛋白；铵离子转运蛋白 Abstract At the industrialization landin cultivated society’S increased，the present，as process Chinais orderto for of demand mount decreasingdaybyday．In satisfy food，a