IL-6%2fJAK%2fSTAT3和TGF-β%2fSmad通路介导肺癌细胞上皮-间充质转化过程的交互作用机制的研究.pdfVIP

IL-6/JAK/STAT3 与TGF-β/Smad 通路介导肺癌细胞上皮-间充质转化过程的交互作用机制研究 中文摘要 中文摘要 背景和目的：肺癌是全世界范围内死亡率最高的恶性肿瘤。超过90%的癌症患 者死亡是转移引起的，因此了解肺癌的转移机制显得尤为重要。上皮-间充质转化 (Epithelial-mesenchymal transition, EMT)作为癌症转移早期阶段的一个关键步骤， 可受多种信号途径的共同调控，其中包括TGF-β/Smad 及JAK/STAT3 信号通路。 本研究旨在探讨TGF-β/Smad3 与JAK/STAT3 信号通路交互作用介导的非小细胞肺 癌细胞发生上皮-间充质转化的作用机制。 方法：（1）外源加入TGF-β1，观察细胞形态，Western blot 检测EMT 分子标 志蛋白及Snail 的表达；使用real-time PCR 和Western blot 检测不同TGF-β1 刺激 时间Snail 的表达。（2）Western blot 检测不同TGF-β1 刺激时间Smad3 和p- Smad3 的表达；加入Smad3 磷酸化抑制剂SIS3 和TGF-β1 共同刺激细胞，观察细胞形态， 使用Western blot 检测EMT 分子标志蛋白及Snail、Smad3 和p- Smad3 的表达。（3 ） 外源加入 JAK/STAT3 信号通路抑制剂 AG490 ，使用 Western blot 检测 Stat3 和 p-Stat3 的表达情况；AG490 和TGF-β1 共同刺激细胞，检测 Smad3、p-Smad3 及 Snail 的蛋白表达，使用real-time PCR 检测其下游靶基因MMP-2 的表达；构建含 有 PAI-1 基因启动子区的荧光素酶报告载体并且检测其荧光素酶的活性；通过 Wound healing 及Transwell 细胞迁移和侵袭实验检测刺激前后细胞迁移及侵袭能力 的变化。（4 ）外源加入IL-6，使用Western blot 检测Stat3 和p-Stat3 的表达情况； IL-6 和TGF-β1 共同刺激细胞，检测EMT 分子标志蛋白、Smad3、Smad4、p-Smad3 及Snail 的表达；通过Wound healing 及Transwell 细胞迁移和侵袭实验检测刺激前 后细胞迁移及侵袭能力的变化。 结果：TGF-β1 刺激后，上皮样的肺癌细胞向间充质细胞形态转化，上皮分子 标志蛋白E-cadherin 表达下调，而间质标志蛋白Vimentin 表达上调。同时磷酸化 的Smad3 （p-Smad3）及Snail 的表达上调。加入Smad3 磷酸化的抑制剂SIS3 可以 削弱TGF-β1 引起的Smad3 的激活、Snail 的上调以及EMT 的进程。更为重要的是， 在A549 和H1650 细胞中JAK2 的抑制剂AG490 可以抑制STAT3 的磷酸化，进而 使p-Smad3，Snail 和MMP-2 的表达降低，同时也使含有PAI-1 基因启动子区的报 I 中文摘要 IL-6/JAK/STAT3 与TGF-β/Smad 通路介导肺癌细胞上皮-间充质转化过程的交互作用机制研究 告载体的荧光素酶活性减弱。另外，AG490 可以减弱TGF-β1 诱导的细胞迁移和侵 袭。然而，在肺癌细胞中外源加入IL-6 激活STAT3，增强TGF-β1 诱导的Smad3 的磷酸化，增加Snail 的表达量，以及加速TGF-β1 介导的细胞迁移和侵袭。 结论：我们的研究结果显示TGF-β/Smad 通路介导的EMT 过程及癌细胞迁移 和侵袭需要 JAK/STAT3 信号通路的参与，且 IL-6/JAK/STAT3 信号通路和 TGF‑ β/Smad 信号通路可以协同作用促进EMT 进程以及癌细胞的转移。抑制这两个信号 通路可能是针对肺癌转移的一个潜在治疗手段。 关键词：上皮-间充质转化；非小细胞肺癌；TGF‑β/Smad 信号通路；JAK/STAT3 信号通路 作 者：曾园园