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尼古丁通过Wnt/β-catenin 信号通路促进16HBE 细胞发生转分化样改变 SPSS Statistical package for the social sciences SPSS 统计软件包 GAPDH Glyceraldehyde phosphate dehydrogenase 磷酸甘油醛脱氢酶 2 尼古丁通过Wnt/β-catenin 信号通路促进16HBE 细胞发生转分化样改变 尼古丁通过Wnt/β-catenin 信号通路促进16HBE 细胞发生转 分化样改变 博士研究生： 导 师： 中文摘要 气道重构( airway remodeling) 是COPD 主要病理特点之一，结果可引起气 道阻塞和肺的弹性回缩力下降，在气流受限中扮演非常重要的角色。最近报道 EMT与气道重构密切相关，EMT可导致气道壁中的成纤维细胞增加，从而参与 气道重构。吸烟作为影响COPD发生、发展的重要危险因素，能够引起气道上皮 发生EMT ；并有证据吸烟能够激活Wnt/β-连环蛋白（catenin ）途径；而在其他因 子导致的EMT发生过程中Wnt途径的激活扮演了重要角色。 尼古丁是烟草中的主要致成瘾成分，临床将其作为香烟替代物用于戒烟治 疗。但是，迄今为止，烟草烟雾中的尼古丁是否直接对成人肺造成不利影响鲜见 报道。有研究显示尼古丁促进胎肺组织内成纤维细胞朝着肌成纤维细胞转化，影 响肺组织的生长发育；体外实验表明尼古丁促进以上转分化过程伴随成纤维细胞 中Wnt/β-catenin 的上调。 我们在前期研究中发现大鼠长期被动吸烟后，肺泡上皮细胞和气道上皮细胞 Wnt/β-catenin表达水平均增加。该途径的激活与人特发性肺间质纤维化一寻常型 间质性肺炎(IPF/UIP)病变，以及EMT过程密切相关。 基于此，我们推测尼古丁可能通过调控Wnt3a/β- catenin信号通路导致上皮细 胞发生EMT ，从而参与气道重构的形成。 所以本实验以尼古丁干预的16HBE细胞为主要模型，探讨尼古丁对EMT 、 对Wnt3a/β-catenin信号通路表达的影响，以及Wnt3a/β-catenin信号通路是否参与 尼古丁促进EMT ，旨在阐明尼古丁诱导EMT从而参加吸烟所致COPD气道重构的 3 尼古丁通过Wnt/β-catenin 信号通路促进16HBE 细胞发生转分化样改变 可能机制。 第一部分：尼古丁对16HBE 细胞转分化的影响 方法：体外培养16HBE 细胞，细胞融合达60%时进行干预。将细胞随机分 -6 为两个处理组培养72 h ：空白对照组（未给予任何刺激物），尼古丁组（6 ×10 mol/L 尼古丁）。以Westemblot 、免疫组化分别检测E-钙粘蛋白（E-cadherin ）、 I 型胶原(COL I)、α-SMA 蛋白的表达。 结果：16HBECs 在干预过程中可见部分细胞形态发生改变，呈现长梭形、 多角形或星形。Westernblot 检测尼古丁组细胞间充质细胞标志物α-SMA、COL I 蛋白的相对含量（目的蛋白与内参条带光密度的比值）分别为0.53 ±0.13 和1.33 ±0.19，高于对照组0.29 ±0.06 和0.44 ±0.13 ；而E-cadherin 蛋白的相对含量则 明显低于对照组分别为0.78 ±0.12 和0.24 ±0.06 。免疫组化检测示尼古丁组间充 质细胞标志物 α-SMA、COL I 蛋白的平均积分光密度值 （A ）分别为0.68 ±0.1 和0.57 ±0.1，高于对照组0.32 ±0.08 和0.25 ±0.04 ；E-cadherin 蛋白的A 值则明 显低于对照组分别为0.41 ±0.08 和0.71 ±0.1。提示尼古丁