丝素纳米颗粒L天冬酰胺酶结合物的生物合成及其体外评价.pdf

丝素纳米颗粒k天冬酰胺酶结合物的生物合成及体外评价 中文提要 中文提要 L．天冬酰胺酶针剂是治疗人急性淋巴细胞白血病的有效制剂，已被广泛应用 于临床，但是，此抗癌药物临床应用中存在抗蛋白酶水解能力弱、机体内半衰期 短以及副作用较严重等问题。为了解决这些问题，本文利用重要的经济昆虫一家 蚕(Bombyxmori．)丝蛋白研制丝素纳米颗粒，探讨作为I广天冬酰胺酶药物缓释载 体的可行性。以丝素纳米颗粒为载体，分别以戊二醛和碳化二亚胺为交联剂，制 备二种丝素纳米颗粒．L．天冬酰胺酶生物结合物(即修饰酶)。以未经修饰的自然酶 为对照，对这种酶生物结合物作了较为系统的体外评价。 实验结果表明用戊二醛为交联剂制备的修饰酶，其最适酶修饰反应条件为0．75 ％戊二醛、交联时间5h、交联温度4℃以及酶与丝素纳米颗粒比7~8：1(U／rag)、 酶活性基团保护剂L天冬酰胺的浓度2．0mg／mL；而用碳化二亚胺为交联剂制备的 修饰酶，其最适酶修饰反应条件分别为0．75％碳化二亚胺、交联时间9h、交联温 度25℃以及酶与丝素纳米颗粒比8：1(U／rag)、酶活性基团保护剂L．天冬酰胺的浓 度3．0mg／mL。两种方法所得到的修饰酶活性回收率分别为43．7％和32．9％；L一天 冬酰胺酶游离酶的表观米氏常数I醢=22．346xlo-3Mol·L．1，而以戊二醛为交联剂的 Mol·L-1，修饰酶较游离酶表观米氏常数均 饰酶的表观米氏常数量‘咖声9．117x10-3 有降低，说明L天冬酰胺酶经丝蛋白纳米颗粒修饰后与底物L．天冬酰胺的亲和性 有所提高：这二种修饰酶热稳定性较游离酶有明显提高，最适pH值范围加宽为 6．0。8．0，最适反应温度提高10℃，抗胰蛋白酶水解能力明显增强，体外半衰期分 别为近50h和近65h，较游离酶3h大大延长。这些结果表明经丝素纳米颗粒连接 以后，L．天冬酰胺酶生物结合物能较好地克服自然酶制剂许多常见的缺点，具有 一定的潜在研究与开发价值。这项技术有可能为新型抗癌药物的深入研究与开发 提供一条新的途径。 关键词丝素纳米颗粒L天冬酰胺酶修饰酶生物结合物体外评价 作 者：相入丽 指导教师：陆小平，张雨青 丝素纳米颗粒L天冬酰胺酶结合物的生物合成及体外评价 英文提要 andinvitroEvaluationofSilkFibroin Preparation Nanoparticles-·L·-AsparaginaseBioconjugates ABSTRACT all the is effectivein treatmentofAcute L-Asparaginase drug Lymphoblastic itsresistancetoalbumen is half-life Leukemia(ALL)．But enzymehydrolysisfeeble，its too theside-effectisserious．Inordertoovercomethese timeis short,and common meritioned this silkfibroin above，in shortcomings study,weprepared nanoparticles silkfibroinofakindof econ