小麦种子蛋白及其赤霉病抗性相关基因的分子鉴定.pdf

小麦种子蛋白及赤霉病抗J蝴关基因的分子鉴定 摘要 依据功能不同可将种子蛋白划分为贮藏功能的谷醇溶蛋白和维持正常代谢功能 的非醇溶性蛋白两类。高分子量谷蛋白亚基(HMW-GS)属于种子醇溶性蛋白，优质 基因可能成为小麦品质改良的重要基因资源。麦类作物种子中还富含属于种子非醇溶 性蛋白中清蛋白的0【．淀粉酶抑制因子(AAI)，能有效抑制内源或外源Q．淀粉酶活性， 控制种子穗发芽、抑制昆虫繁殖。赤霉病是小麦主要病害之一，易感染开花期的小穗 和发育早期的籽粒。赤霉菌会扰乱种子贮藏蛋白的合成或者消耗种子中的蛋白、糖来 供自己繁殖，从而破坏发育中的籽粒。本文对小麦种子蛋白HMW-GS、AAI进行了 基因克隆、与进化分析，并对抗赤霉菌材料的基因表达谱进行了分子鉴定，主要结果 如下： 1．从二倍体长穗偃麦草中分离并鉴定了4个新型HMW-GS编码基因，分别编码 1个与普通小麦HMW-GS相比特殊的Cys，推测这两个亚基在小麦品质育种中具有 潜在利用价值。对小麦族不同物种HMW-GS的N．端序列进行比对分析发现，x．型和 系统进化分析表明，HMW-GS编码基因在漫长的基因复制过程中相对独立，且一直 保持着其生物学功能。来自普通小麦A、B、D基因组的HMW-GS存在明显差异， 具有染色体组特异性。 2．从普通小麦及近缘物种中克隆获得与昆虫抗性有关的635个二聚Ⅱ．淀粉酶抑 淀粉酶抑制因子(WTAI)编码基因序列。对Q．淀粉酶抑制因子序列与功能分析，探 讨了该家族成员间的理化、功能(如等电点、迁移率、对蛋白酶的抑制范围和活性) 差异的分子基础。建立了一种利用序列中SNP位点开发出特异标记引物将功能基因 定位于普通六倍体小麦具体基因组的方法，由此将来自普通小麦的WDAI基因定位 列，但分子证据揭示普通小麦A基因组不含有WDAI编码基因，而是否含有WMAI 编码基因则需要进一步研究。依据序列特征，推Nd,麦及其近缘物种中WDAI源于 共同的祖先基因，而小麦及山羊草的WMAI也可能由一共同的祖先基因通过复制与 突变进化而来，但是WMAI相似性明显比WDAI高，变异程度更低。 3．依据序列分析发现二倍体一粒系小麦由于碱基插入导致无0L．淀粉酶抑制因子 活性的分子基础。一粒系小麦中WDAI编码基因差异与基因组来源有关，与地理来 源关系不明显。Am基因组的WDAI基因与A“基因组的基因相比进化速率更慢、变异 程度更低；依据普通小麦B基因组和拟斯卑尔托山羊草组S(S、S1、S5、S5“和Sb) 基因组159个WDAI基因序列中SNP位点差异，共发现59种呈“星”形分布的单倍型， 并可归为5个主要的单倍型组。普通小麦和野生二粒小麦B基因组上的WDAI基因 与来自拟斯卑尔脱山羊草S基因组上的WDAI基因最相似，但是推测多个拟斯卑尔 托山羊草组物种可能通过种间杂交时的基因渐渗参与了多倍体小麦B基因组WDAI 基因位点的形成。小麦族11个属20个基因组的WDAI基因的分子系统进化分析表 明，WDAI编码基因差异与基因组系统进化有关，且在基因组分化以前该位点就已经 存在。这些结果为深入了解WDAI基因位点上基因重组、整合事件及发生过程提供 了重要信息，有助于加深对WDAI功能的了解。 4．对以色列野生二粒小麦0【．淀粉酶抑制因子基因的遗传结构、分化程度及其与生 态因子间的关系进行了系统研究。WMAI序列所包含遗传信息较低；WTAI序列同样 非常一致。无论是在居群内还是居群间，野生二粒小麦WDAI基因位点都存在变异， 居群间遗传距离与地理来源关系密切。野生二粒小麦WDAI基因序列∞值(K涨s) 大于l，表明该基因位点为正选择位点，存在明显的选择压力导致WDAI基因序列产 生多样性及遗传和功能差异。WDAI编码基因中SNP标记所揭示的16个居群遗传多 位点的多样性，特别是几个水分因子对SNP位点有极显著影响，推测水分作为主要 选择压力通过影响昆虫数量间接影响0【．淀粉酶抑制因子遗传结构变异、分化程度。 5．获得与过敏性哮喘相关的小麦种子潜在变应原编码基因。利用生物信息学手段 对小麦种子蛋白质变应原与公认主要变应原a．淀粉酶抑制因子进行了比较，并预测编 码蛋白质高级结构。由于过敏哮喘与由lgE介导的超敏反应有关，推测这些蛋白质具 2 有能与IgE结合相似的结构域。 6．对一套中国春．长穗偃麦草附加系、代换系、端体异附加系材料的赤霉病抗性 推测7E染色体上存在潜在的赤霉病抗性基因或能诱导／抑制