胰岛素样生长因子-I、肝细胞生长因子、转化生长因子-β1、干扰素-y对奶牛乳腺上皮细胞增殖活性的影响.pdfVIP

中国畜牧兽医 2014年第 41卷第 4期 生物技术 ·37 · 胰 岛素样生长因子一I、肝细胞生长因子、 转化生长因子一I]I1、干扰素一对奶牛 乳腺上皮细胞增殖活性的影响 李莹莹 ，夏小静 ，吴云娣。，何伯萍 ，闰新武 ，高媛媛 ，王玉平 ，雷连成 (1．吉林大学动物科学学院，吉林长春 130062；2．吉林大学动物医学学院，吉林长春 130062) 摘要 ：本试验应用组织块培养和差速消化法获取原代奶牛乳腺上皮细胞 ，免疫荧光鉴定正确后 MTT法评价不 同浓度 的 胰岛素样生长 因子一I(insulinlikegrowthfactor-I，IGF-I)、肝细胞生长 因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)、转化生长 因 子一H1(transforminggrowthfactor-131，TGF一81)、干扰素一7(interferon一7，IFN7)对奶牛乳腺上皮细胞体外增殖 的影响。结果表 明，IGF-I、HGF分别在 lO～200和 0．1～100ng／mL对乳腺上皮细胞 的增殖呈正相关 ，而TGF-~I1(2．5～100ng／mL)、IFN一 (5～16Ong／mI)则剂量依赖性地抑制乳腺上皮细胞增殖 。提示 ，IGF—I、HGF均能促进奶牛乳腺上皮细胞 的体外增殖 ，该作 用在一定浓度范围内有剂量依赖性 ；TGF-3／1、IFN一．y对乳腺上皮细胞 的增殖作用 出现剂量抑制效应 。 关键词 ：细胞因子 ；乳腺上皮细胞 ；原代培养 ；细胞增殖 中图分类号 ：$823 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671-7236(201404—0037—06 牛的乳腺是由上皮组织和结缔组织组成的一个 胞生长因子 (hepatocytegrowthfactor，HGF)、转化 可再生组织，其发育和泌乳过程极其复杂 ，受激素和 生长因子一J31(transforminggrowthfactor—t?1，TGF— 生长因子等多种因素调节。调节牛乳腺发育和泌乳 J31)、干扰素～7(interferon-7，IFN一了)这 4种生长 因 的生长因子主要包括胰 岛素样生长 因子 (insulin— 子对乳腺上皮细胞增殖 的影响，以期更好地 阐明 likegrowthfactors，IGFs)家族 、表皮生长因子 (epi— 乳腺发育和泌乳机理 ，以及这 4种细胞 因子对乳 dermalgrowthfactor，EGF)家族 、成纤维细胞生长 腺上皮细胞乳脂 、乳 蛋 白分泌 的影响 ，从而为下一 因子 (fibroblastgrowthfactor，FGF)家族 、转化生 步深入探讨细胞 因子对奶牛泌乳机制 的影响奠定 长因子一p(transforminggrowthfactor—p，TGF—p)、 基础 。 瘦素 (1eptin)及 甲状旁腺素相关蛋 白(parathyroid 1 材料与方法 hormonerelatedprotein，PTHrP)等 (李庆章等 ， 1．1 材料 2004)，并已确定这些生长 因子可通过 自分泌或旁分 1．1．1 组织来源 试验动物为长春市屠宰场健康 泌的形式影响乳腺上皮细胞 的增殖及其活性 (Ima— 的泌乳 中后期黑 白花奶牛 ，屠宰后获取乳腺组织 gawa等，2002)。但是 ，包括 TGF—I31在 内的多种生 样品。 长因子对细胞的增殖作用取决于细胞类型、培养条 1．1．2 主要试剂 兔抗角蛋 白18抗体、兔抗波形 件及有无其他生长因子的参与(Chen等 ，2003)。为 蛋白抗体均购 自北京博奥森生物技术有 限公司； 了进一步明确生长因子对奶牛乳腺上皮细胞体外增 IGF～I、HGF、TGF—B1均购 自PeproTech公 司 ； 殖的调节作用 ，本研究在乳腺上皮细胞体外分离培 IFN-7购 自KingfisherBiotech公 司 ；DMEM／F12 养的基础上 ，从剂量效应方面探讨胰 岛素样生长 因 购 自Gibco公司；