移植沉默TSG-6基因的骨髓间充质干细胞对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响.pdfVIP

第35卷 第 1期 中山大学学报 (医学科学版) Vol-35 No．1 2014年 1月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Jan． 2014 移植沉默TSG一6基因的骨髓问充质干细胞对大鼠肝脏 缺血再灌注损伤的影响 刘双权 ，成名翔 ，龚建平 ，涂 兵 ¨ (重庆医科大学 1．附属第二医院肝胆外科，重庆 400010；2附属第一医院肝胆外科，重庆 400016) 摘 要：【目的】在大鼠肝脏缺血再灌注模型中，观察移植沉默TSG一6基因的骨髓间充质干细胞(BMSC)对大鼠肝脏缺 血再灌注损伤(HIRI)的影响。 【方法】全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，流式细胞学鉴定，慢病毒载体(LV3一 sh11SG一6)感染下调TSG一6基因的表达；60只sD雌性大鼠70％肝脏缺血再灌注损伤模型的建立 ，随机分4组 ，PBS组、BMSC 组 ，shRNA—NC—BMSC组、TSG一6一shRNA—BMSC组 ；各组大鼠分别于恢复灌注后3、6、24h取血检测血清中ALT、AST、TNF— ot、IL一6含量 ，恢复灌注后 6h取中叶肝脏组织 ，WesternBlot检测 TSG一6蛋 白表达 ，切片 HE染色后光镜观察肝组织显微结 构。 【结果】体外分离培养的BMSC状态稳定，增殖能力强，表达CD29及CD44，不表达CD34及CD45，慢病毒感染下调 BMSC的TSG一6基因表达效率达73．99％：大鼠肝脏 70％缺血再灌注损伤模型稳定，各时间点TSG一6一shRNA—BMSC组的 ALT、AST、TNF一 、IL一6含量均高于 BMSC组和 shRNA—NC—BMSC组 (P0．05)；BMSC组和 shRNA—NC—BMSC组的ALT、 AST、TNF—ot、IL一6含量均低于PBS组 (P0．05)：TSG一6一shRNA—BMSC组的肝脏TSG一6蛋白表达低于BMSC组和 shRNA— NC—BMSC组 (P0．05)，PBS组未见 TSG一6蛋 白表达；TSG一6一shRNA—BMSC组的肝组织损伤较 BMSC组和 shRNA—NC— BMSC组重，与PBS组无明显区别，BMSC组和 shRNA—NC—BMSC组的肝组织损伤较PBS组明显减轻。 【结论】移植BMSC 能改善肝缺血再灌注损伤，移植沉默TSG一6基因的骨髓间充质干细胞削弱了其对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。 关键词 ：骨髓间充质干细胞 ；肿瘤坏死因子刺激蛋 白6；肝脏缺血再灌注损伤 中图分类号：R657．3 文献标志码：A 文章编号：1672—3554(2014)01—0047—07 EffectsofSilencingTSG-6GeneModifiedMesenchymalStem CellsTransplantationon HepaticIschemiaReperfusionInjuryinRats LIUShuang—quan，CHENGMing—xiang，GONGJian—ping，TUBing (1．DepartmentofHepatobiliarySurgery，TheSecondAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010， China；2．DepartmentofHepatobiliarySurgery，TheFirstAffiliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity， Chongqing400016，China) Abstract： O【bjective】ToevaluatetheeffectofTSG一6silencedbonema~owmesenchymalstemcells (BMSC)onhepatic ischemiareperfusioninjury(HIRI)ofrats．M【ethods