细胞核肌动蛋白参和基因转录调控的分子机制分析.pdf

摘 要 | f肌动蛋白是一类高度保守的蛋白质，它不仅广泛存在于真核细胞 的细胞质中，参与许多重要的生理活动，而且普遍存在于各类细胞的 细胞核中。相关的结构和功能方面的研究已经表明，肌动蛋白在细胞 核中可能参与了mRNA加工和运输、染色质集缩和染色体构建、染色 质结构调整、基因转录调控、细胞的凋亡与衰老等许多重要生理功能。 其中关于肌动蛋白可能参与了基因转录的报道大都是通过肌动蛋白抗 体或肌动蛋白结合蛋白的作用间接证明的，肌动蛋白直接参与基因转 录调控活动的报道还很少见。 近年来，肌动蛋白存在于依赖于ATP的染色质改构复合物(BAF) 的发现引起了相关科学工作者的普遍关注。依赖于ATP的染色质改构 复合物对核小体结构的调整是基因转录的必要前提。肌动蛋白在BAF 复合物中与其核心亚基BRGl直接作用，是BRGI发挥最大ATP酶活性 所必需的。鉴于肌动蛋白与BRGl的这种作用，细胞葳，中肌动蛋白很可 能在转录调控方面具有尚不为人们所知的作用。∥ 本文通过瞬时向细胞核中转染肌动蛋白，检NIJCSF．1和c-fos基因的 转录情况，研究细胞核肌动蛋白是否直接参与了基因转录的调控活动。 荧光素双报告系统检测及RT．PCR实验结果证实，细胞核肌动蛋白直接 调控了内源和外源的CSF．1和c-fos基因的转录。肌动蛋白促进CSF一1基 因转录，而抑Nc-fos的基因转录，表明细胞核肌动蛋白调控基因转录 具有复杂的机制。实验证明肌动蛋白对CSF．1和c如s基因转录的调控活 动需要基因的启动子序列形成染色质结构和Z。DNA结构。肌动蛋白分 子的羧基端、氨基端及ATP结合区域合并羧基端的缺失突变可以明显 降低对基因转录的调控作用，其中缺失ATP结合区域合并羧基端的突 变体几乎丧失了转录调控作用。实验结果还发现过表达细胞核肌动蛋 白能够提高细胞核裂解液的ATP酶活性，而肌动蛋白缺失突变体则没 有此作用。肌动蛋白及其缺失突变体对细胞核裂解液的ATP酶活性的 影响与它们对基因转录的调控作用趋势相一致。这些实验结果提示肌 动蛋白参与基因转录的调控很可能与细胞核的ATP酶活性密切相关。 本论文明确了细胞核肌动蛋白在基因转录调控中的作用，为进．步 深入探讨其参与基因转录调控活动的机制奠定了基础。 关键词：细胞核肌动蛋白；依赖ATP的染色质改构复合物；基因 转录调控；CSF--1；eros,ATP酶 Abstract Actinisa conservedwhichisknown011 highly protein toact many crucialevensnot inthe butalsoin thenucleiof only cytoplasm eukaryotic studiesonthestructureandfunction cells．The haveindicatedthatnuclear take in actin the and of chromotin may part processtransportmRNA，the and contractionchromosome chromatin formation，theremodeling，the of actinWaS regulation andthecellsenescence．Nuclear genetranscription in earlier the transcription tentativelyimplicated by experimentsshowing