水杨酸-3-羟化酶通过调停水杨酸的分解代谢控制拟南芥叶片寿命.doc

水杨酸-3-羟化酶通过调停水杨酸的分解代谢控制拟南芥叶片寿命 植物激素水杨酸（SA）在植物的防御机能、应激反应和衰老中起着重要的作用。尽管SA的生物合成（途径）已经被很好的了解了，但是SA是以哪种方式被异化分解代谢还是难以捉摸的。我们在叶片的衰老期中找到一种涉及到SA的异化分解的物质—水杨酸-3-羟化酶，并在这篇文章中报道该酶鉴定方法和特性描述。在植物衰老期间，S3H（水杨酸-3-羟化酶）可以通过SA诱导的与植物衰老产生联系，并且是SA标准的负反馈调节系统中的一个关键部分。这种酶将SA（Km=58.29μM）转变为2,3-2羟基苯甲酸和2,5-2羟基苯甲酸在试管内但是仅仅2,3-2羟基苯甲酸是活泼的（估计是有活性的）。S3H淘汰的突变体未能产生2,3-2羟基苯甲酸糖耦合物（偶联物），因此积累了非常高水平的SA（这里估计指含量）以及SA的糖耦合物，然后使植物过早的呈现出衰老的迹象。相反的，S3H（突变产生了功能，估计能分解SA和它耦合物的S3H）列出了一个现象，包含高水平含量的2,3-2羟基苯甲酸耦合物以及极低水平的SA和它的耦合物，展示了一个令人注意的可以延长叶片寿命的能力。这篇文章揭示了一个简洁的SA异化代谢的机理即植物调节SA含量通过将SA转变为2,3-2羟基苯甲酸来阻止SA积累过多。这篇文章也提供了一个强有力的分子基因证据关于SA在调节叶片衰老的起始和评估（rate和onset）中起着重要的作用。 SA（水杨酸，又称2-羟基苯甲酸），是一种酚类化合物，已经被人类分析利用其医学价值200多年了，最近其作为一种植物激素在植物抗病、叶片衰老、开花和生热作用（产热机能）也已经被更多的研究开发出来。SA在植物防御功能和超敏反应（一种植物快速编程性细胞死亡的形式）中扮演的角色也已经被集中地调查出来。叶片衰老是一种慢速的编程性细胞死亡，在这种过程中可以允许植物把衰老细胞中的营养品释放并运往种子、贮藏器官或者有活性的正在成长的组织。尽管有关SA在叶片衰老中所扮演的角色还不是很清楚，但是这里还是有一些事实能证明SA的重要作用：在疾病预防和叶片衰老这两者似乎分享了SA的信号传递和管理中某些部件（成分）。 已经有更多的研究来指出SA的生物合成。在植物中，有两种SA的生物合成途径：1.PAL（苯基丙氨酸氨基裂解酶异分支酸合成酶水杨酰Pet28a-S3H。全部的构建产物都已经通过DNA测序。 叶绿素部分，Fv/Fm试验和存活曲线。叶绿素已经被提前提取和定量测定。叶片中的荧光性被测量通过使用一种简易的荧光测定器。每一片叶片都被直接的定量测定Fv/Fm通过荧光计。这个存活曲线是基于观察叶片的黄色程度。完全变黄的植物被认定为死亡叶片。WT、s3h和S3HOE1植物的存活率被认为从20DAG到70DAG。 转录产物分析。采用RNA提取法和RNA印迹依次被使用。DNA模板为探针标签已经被以下的引物扩增出来了：S3H,G2956和G32957，AtNAP，G3149和G3150，SAG12,,G10和G246，SAG13，G9和G16，EDS1，EDS1F和EDS1R，PAD4，PAD4F和PAD4R以及PR1，PR1F和PR1R。RNA凝胶用溴化已锭着色分析。 转化。 代谢物分析。 S3H重组蛋白的表达和在细菌中的提纯。 酶的测定。 参考文献。