EGFRRVⅢ在恶性多形性胶质瘤中的表达及功能.pdfVIP

…IllI t TI I IIIIII IrllIII Y1844776 目 录 一、摘要 中文摘要………………………………………………………………………1 英文再要………………………………………………………………………5 二、英文缩略语……………………………………………………………………．10 三、论文 前言……………………………………………………………………………11日U舌……………………………………………………………………………ll 材料方法………………………………………………………………………12 实验结果………………………………………………………………………2l 讨论……………………………………………………………………………28 结j沦……………………………………………………………………………34 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………35 五、参考文献………………………………………………………………………36 六、附录 综j盎……………………………………………………………………………45 在学期间科研成绩……………………………………………………………60 致谢……………………………………………………………………………61 个人简介………………………………………………………………………62 ·中文论著摘要· EGFRRvIII在恶性多形性胶质瘤中的表达及其功能 刖吾 EGFRvIII蛋白是EGFR蛋白最为常见的一种变构形式，其在多种肿瘤组织中 尤其是人脑恶性胶质瘤组织中有所表达，但在人体正常组织中却无表达。EGFRvlII 这种变构蛋白是由正常EGFR基因中的第1与第8外显子直接接合，在连接处形 成新的甘氨酸而形成。正常EGFR基因的第2．7外显子缺失使得正常EGFR蛋白 的细胞外功能域部分的267个氨基酸缺失而形成EGFRvlII蛋白。这种变构的 EGFR蛋白在肿瘤组织中不需与EGFR相应配体相结合就能够被持续的激活，进 而进一步促进肿瘤组织的发生发展。一方面，EGFRvIII蛋白只在肿瘤组织中表达 而不存在于正常组织中；另一方面，产生EGFRvIII蛋白的细胞，其在增殖、侵袭 及血管发生等方面均表现出了各种调节失控进而促进肿瘤发生发展的作用。因此， EGFRvIII蛋白是肿瘤的免疫治疗中是备受关注的抗原靶点之一。在人多形性恶性 胶质瘤中，EGFRvlII蛋白能够促进肿瘤细胞的增殖与侵袭，其这种促进肿瘤发生 材料与方法 l、肿瘤样本的收集 所有GBM肿瘤患者样本均由中国医科大学附属第一医院神经外科提供，经 患者知情同意后，手术中获取。所有肿瘤样本均病理诊断为IV级恶性胶质瘤。肿 瘤样本获取后，存放于．80℃深低温冰箱里，备用。 2、总RNA的提取及RT-PCR RNAiso 使用Takara Reagent试剂按照说明书，提取肿瘤样本总RNA。经分光 RNA 于RT-PCR及realtime PCRKit RT-PCR实验。提取总RNA500ng，使用TaKaRa 本变性94C2分钟，PCR扩增94C30秒，55℃30秒，72℃1分钟：30个循环。 电泳。PCR产物进一步测序验证。 3、免疫组化 标本经福尔马林固定，石蜡包埋，5um切片。切片常规脱蜡至水，抗原修复。 Peroxide HydrogenBlock中孵育30min。滴加适当浓度鼠抗人单克隆抗体DH8．3， 4C过夜，滴加酶标二抗，DAB显色。 4、细胞培养 U87．MG．EGFRvlII由W．Caveneeand F．Fumari教授友情馈赠