RIG-K基因功能与cAMP-PKA信号的作用分析.pdf

上海第二医科大学博士论文 全反式维甲酸诱导APL细胞分化机制 一一R，G_K基因功能和cAMP．PKA信号的作用研究 中文摘要 ／ ／急性早幼粒细胞白血病(APL)以其特异的细胞遗传学改变和对全反式维 t 甲酸(ATRA)的临床反应性而得到人们的高度重视。已知ATRA通过与其 细胞因其特异的染色体易位导致RARa与相应的转录因子融合(PML／RARot， 号传导通路，造成细胞分化阻滞在早幼粒细胞阶段．药理剂量全反式维甲酸 变及野生型受体与CoR／CoA复合物之间的相互作用关系已经明确，但受体信 号的下游事件仍不清楚，因此ATRA调控基因的筛选和功能分析对ATRA诱 导分化机制的研究至关重要。另一方面，大量事实表明，除了RAR及其调控 基因外，一些其它和细胞分化、存活、增殖等密切相关的重要信号分子也可 能参与ATRA诱导的细胞分化．其中，最重要的可能是cAMP信号分子。基 ＼／ 于这些分析，1本论文包括两个部分。其中，第一部分主要在于研究维甲酸调 ／ APL细胞分化中的作用． 表达受到ATRA的诱导调控，而且这种调控不能被蛋白合成抑制剂放线菌酮 所抑制，提示RIG-K是一个受ATRA直接调控的靶基因。进一步研究发现， RIG-K基因存在三种不同的转录本，即长型、中型和短型RIG-K，分别编码 患者新鲜骨髓单个核细胞的半定量RT．PCR结果显示，ATRA能迅速上调长 型或中型RIG．K的表达，而短型RIG-K的表达则不受ATRA的调控。 上海第二医科大学博士论文 ＼ 的细胞系，然后再用ATRA处理不同时间后，核酶转染细胞的分化程度低于 空载体转染的对照组，说明抑制RIG—K表达可以部分阻断ATRA诱导的NB4 ＼ 用埚进一步深入研究RIG-K的功能提供了线索。本文采用酵母双杂交实验 ／ 外，还具有把信号通路整合到actin细胞骨架的功能，提示RIG．K通过影响 APL细胞分化的过程中发挥重要作用。但其确切的生物学功能还有待更深入 研究。 在第二部分中，本文首次发现NB4细胞在经RA处理的10分钟即出现 细胞内cAMP浓度显著上升；而在RA抵抗的NB4．R1细胞则缺乏该效应。 t 1 ， 因的范畴。 ＼ 的作用所获得的重要发现，对于进一步明确ATRA的效应机制，在更深广的 层次上把握RA诱导分化的调控网络，进而为发展新的分化诱导剂提供重要 线索等方面具有重要意义．＼ 7 、／ 、， 关键词：急性早幼粒细胞性白血病、诱导分化、ATRA调控基因Rig-K；。 功能基因组ycAMP信号传导… 上海第二医科大学博士论文 Retinoic MechanismofAll—trans Acid(ATRA)for InductioninAcute leukemia(APU Promyelocytic ofRIG-KandRoleofcAMP—PKA Gene signals The been researchonacute promyelocytic in