胶质瘤干细胞诱导神经胶质细胞癌变及其相关机制分析.pdf

胶质瘤干细胞诱导神经胶质细胞癌变及相关机制研究 中文摘要 胶质瘤干细胞诱导神经胶质细胞 癌变及相关机制研究 中文摘要 第一部分 胶质瘤干细胞诱导宿主脑胶质细胞 癌变的实验研究 目的： 探讨人胶质瘤干细胞在裸鼠脑内组织重构过程中，肿瘤干细胞与宿主神 经细胞的相互作用。 方法： 将红色荧光蛋白（RFP ）基因稳定转染到已建株的人胶质瘤干细胞SU3， 再将转染RFP 的SU3 细胞（SU3-RFP ）接种于表达绿色荧光蛋白（GFP ）的裸小鼠 脑内。获取移植瘤组织，筛选增殖能力强的GFP 细胞，单克隆化后，鉴定细胞类型， 测定细胞DNA 含量，行染色体显带分析。并将建系的GFP 细胞H1 和H9 分别接种 于裸小鼠腋下和颅内，观察这两株细胞的致瘤率和相关癌性表型。 结果： 在接种30 天后的移植瘤组织中，RFP 、GFP、RFP/GFP 细胞的比例分别 为（88.99 ±1.46）% 、（5.59 ±0.68 ）%和（4.11 ±1.02）% 。经二次单克隆化的宿主 GFP 细胞株H1 、H9 ，在体外表现出无限增殖、接触抑制消失、超四倍体等癌细胞特 征，并且表达少突胶质细胞特异性标志物2′，3′-环腺苷酸-3′-磷酸二酯酶 （CNP ）。H1 和H9 细胞在裸鼠体内致瘤率均为100%，且肿瘤细胞均向临近组织广泛浸润性生长。 结论 在可移植性胶质瘤模型中的肿瘤细胞，并非像传统观点那样均来源于移植 的外源肿瘤干细胞，被接种的胶质瘤干细胞侵袭的宿主脑胶质细胞也能转化为恶性肿 瘤细胞。 关键词： 胶质瘤干细胞；肿瘤移植；癌变；双色荧光示踪；裸小鼠 I 中文摘要 胶质瘤干细胞诱导神经胶质细胞癌变及相关机制研究 第二部分 胶质瘤干细胞诱导宿主脑胶质细胞癌变 相关机制的初步研究 目的： 初步探讨胶质瘤干细胞诱导小鼠脑胶质细胞癌变的相关分子机制。 方法： 将红色荧光蛋白（RFP ）基因稳定转染于已建株的胶质瘤干细胞 SU3， 和U87-MG 细胞株，再将干细胞状态下培养的SU3-RFP 细胞和U87-RFP 细胞接种于 表达绿色荧光蛋白（GFP ）的裸小鼠脑内。取得移植瘤组织，原代培养数天后，通过 高速分选流式细胞仪，分别获得GFP 细胞和RFP 细胞。筛选获得的GFP 细胞继续体 外培养，筛选高增殖能力的GFP 细胞，同前法检测其癌性表型。PCR 检测GFP 细胞 的PDGFR- α表达，RFP 细胞的PDGF-B 表达。 结果： 在脑移植瘤中，SU3-RFP 细胞接种 GFP 裸鼠颅内收获的移植瘤中 GFP （SU3-GFP ）细胞比例明显高于U87-RFP 细胞接种GFP 裸鼠颅内收获的移植瘤中GFP （U87-GFP ）细胞比例，分别为：（5.59 ±0.68 ）%、（1.07±1.00）%，PCR 结果提示 SU3-GFP 细胞中PDGFR- α表达明显高于U87-GFP 细胞，而分选获得的RFP 细胞中， SU3-RFP 细胞中PDFG-B 也明显高于U87-RFP 细胞。对分选获得的两类GFP 细胞继 续培养，SU3-GFP 细胞中部分细胞表现出无限增殖的潜能，而U87-GFP 细胞在培养 过程中逐渐凋亡，实验重复三次，并未发现存在无限增殖潜能的GFP 细胞。 结论：不同侵袭性的胶质瘤干细胞在体内诱导鼠脑胶质细胞癌变的能力有差异， SU3-RFP 细胞诱导小鼠脑胶质细胞癌变机制可能为 SU3-RFP 细胞高表达PDGF-B ， GFP 细胞表面的PDGFR- α高表达，因PDGF-B 与PDGFR- α结合增多，从而启动胶 质前体细胞癌变。 关键词： 流式细胞术；PDGFR- α；PDGF-B ；细胞癌变