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丝素材料对碱性成纤维细胞生长因子的吸附和控释 中文摘要 丝素材料对碱性成纤维细胞生长因子的吸附和控释 中文摘要 生物材料植入体内后，表面吸附的体液中的蛋白质介导着材料与机体的相互作 用。碱性成纤维细胞生长因子（bFGF ）是体液中的重要蛋白质成份，具有刺激多种 细胞生长的生物活性。从分子和细胞水平赋予蚕丝丝素蛋白材料以主动刺激细胞生长 和组织再生修复的功能是丝蛋白生物材料领域的前沿技术问题。本文较系统地研究了 家蚕和柞蚕丝素膜对 bFGF 的等温吸附行为、吸附动力学特征及其对人皮肤成纤维细 胞的生长的影响，在此基础上，用同轴静电分化与冷冻干燥相结合的技术制备载 bFGF 的丝素微球，并将微球装载于丝素多孔材料内，制得载bFGF 的丝素多孔材料，研究 多孔材料中bFGF 的释放行为及其促进细胞生长的活性。 首先，采用荧光蛋白标记的方法成功地对 bFGF 进行了标记，并研究了 bFGF 在 家蚕丝素膜、柞蚕丝素膜和聚己内酯（PCL ）膜表面的等温吸附行为、吸附动力学特 征和吸附形态特征。随着 bFGF 初始浓度的增大，丝素膜对 bFGF 的吸附量逐渐增多， 且家蚕丝素膜表面 bFGF 吸附量最大，bFGF 在丝素膜和 PCL 膜表面的吸附符合朗缪 尔模型；bFGF 在吸附初始阶段表现出较快的吸附速率，在吸附 60 min 后基本达到吸 附平衡；利用荧光倒置显微镜、扫描电镜和原子力显微镜观察bFGF 在材料表面的吸 附形态，结果表明，bFGF 在材料表面吸附后形态发生了不同程度的变化，在家蚕丝 素膜和柞蚕丝素膜表面呈现圆形或不规则形状的小块，而 PCL 膜上 bFGF 仍保持原 有的条形结构。 其次，通过体外细胞培养，研究了家蚕丝素膜，柞蚕丝素膜和 PCL 膜表面对人 皮肤成纤维细胞（HSF ）在吸附bFGF 前后的的生长和增殖情况。HSF 细胞能够在丝 素膜和 PCL 膜表面紧密黏附，形态正常，培养一段时间后，相互之间紧密连接，细 胞数量随培养时间的延长而逐渐增加。MTT 法测定细胞活力的结果表明，与 PCL 膜 相比，丝素膜促进细胞增殖的能力更强；吸附 bFGF 后的丝素膜和 PCL 膜与未吸附 相比，在培养的各个时间段均具有较高的细胞增殖活力，提示 bFGF 发挥了其生物活 性作用；柞蚕丝素膜由于柞蚕分子氨基酸序列中的 RGD 存在，在三种膜中表现出了 最优的促细胞增殖活力。 I 中文摘要 丝素材料对碱性成纤维细胞生长因子的吸附和控释 再次，利用同轴静电分化和冷冻干燥技术相结合的方法制备了载 bFGF 芯壳结构 的丝素微球，扫描电镜观察表明微球表面及内壁均有大量微孔存在。将该微球装载到 丝素多孔材料后制备成载 bFGF 的丝素多孔材料，并进行了体外释药实验。结果表明， 载 bFGF 的丝素微球和载bFGF 的多孔材料均表现出平稳较慢的释放速率，可在体外 持续释放 bFGF 两周以上，而直接吸附 bFGF 的丝素多孔材料表现出了对bFGF 的突 释，且 48 h 内基本实现完全释放。体外培养HSF 的测定结果表明，载bFGF 的丝素 材料在各时间点的细胞活力均优于纯丝素多孔材料及空板，说明丝素多孔材料作为 bFGF 缓释载体，能够保持 bFGF 的生物活性，具有良好的生物相容性。 通过本文的研究，阐明了家蚕丝素膜和柞蚕丝素膜对 bFGF 的吸附能力的强弱及 达到吸附平衡所用的时间，并建立了吸附模型，为进一步理解 bFGF-丝素材料相互作 用提供了依据；同时通过构建一种能保持 bFGF 活性，且能实现对 bFGF 平稳缓慢释 放的载体，为生长因子缓释系统提供了一种新的材料。 关键词：丝素蛋白；碱性成纤维细胞生长因子；吸附；控释；细胞相容性 作 者：王玲爽 指导教师：李明忠 教授 II The Adsorption and Controlled Release of