核酸的理化性质.pptVIP

核酸的理化性质 一.一般的物理性质 1. 形 态 DNA —— 白色纤维状固体 RNA —— 白色粉末状固体 一.一般的物理性质 2. 溶解性 微溶于水 不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂 RNA核蛋白体(RNP)易溶于0.14mol/L的NaCl溶液 DNP可溶于高浓度(1~2mol/L)的NaCl溶液 一.一般的物理性质 DNA溶液粘度极高(因其分子直径小而长度大) RNA溶液粘度要小得多 3. 粘 度 核酸变性或降解后，粘度降低 核酸既含有酸性的磷酸基团，又含有弱碱性的碱基，故可发生两性解离。其解离状态随溶液的pH值而改变。 二. 两性解离 由于磷酸基团的酸性很强，所以pI较低，整个分子相当于多元酸。 利用核酸的两性解离可以通过调节核酸溶液的pH来沉淀核酸，也可通过电泳分离纯化核酸。 嘌呤和嘧啶具有共轭双键，能强烈吸收紫外光。在260nm处有最大吸收峰。对于纯的DNA或RNA，可以通过测得A260来推测其核酸含量。 纯的DNA：A260/ A280 =1.8 纯的RNA：A260/ A280 =2.0 三. 紫外吸收性质 A260/ A280值可以反映核酸的纯度。 1. 变性的概念 核酸在某些物理或化学因素的作用下，其空间结构发生改变，从而引起理化性质的改变及生物活性的降低或丧失。 A260值升高 粘度下降 沉降系数加快 …… 四.变性与复性 (一) 变 性 (一) 变 性 2. 引起变性的因素 物理因素： 热（热变性） 紫外、辐射等 化学因素： 过酸（酸变性） 过碱（碱变性） 有机溶剂 尿素…… 使氢键断裂，破坏碱基堆集力，从而引起核酸二级结构的破坏。 (一) 变 性 3. 增色效应 变性后的DNA对260nm的紫外光吸收值比变性前明显升高，这种现象称为增色效应。 这是由于变性的DNA双螺旋解体，藏于螺旋内部的碱基暴露出来。 增色效应常可用来衡量 DNA变性的程度。 (一) 变 性 4. 热变性曲线(熔解曲线) 在DNA发生热变性的过程中，A260随温度的变化曲线。 不同DNA的熔解曲线不同，但很类似。都是 —— S 形曲线 变性百分率 100 50 0 温度 A260 (一) 变 性 又称 熔解温度、熔点 5. 解链温度(Tm值) ( melting temperature) 指DNA的变性达到50%，即增色效应达到一半时的温度 DNA的Tm值一般在70~85℃之间 变性百分率 100 50 0 温度 A260 Tm (一) 变 性 影响Tm值的因素： DNA分子中GC碱基对的含量DNA分子中GC含量高，则Tm值大 5. 解链温度(Tm值) DNA的溶液环境如离子强度、pH (一) 变 性 RNA含局部双螺旋，也可发生变性。 RNA的变性 特点： 变性效应不如DNA明显 增色效应的跳跃较平缓 Tm值较低