拟南芥类受体蛋白激酶RLK80的功能分析.pdfVIP

分类号 密级 学校代码 149 学号2Q12Q红41 拟南芥类受体蛋白激酶RLK80的功能研究 Function of kinase Analysis Receptor-like RLK80in thaliana Arabidopsis 指导教师姓名、职称奎壅昼塾撞，里童叠进竖 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一五年五月 万方数据 摘 要 植物类受体蛋白激酶是一类重要的植物蛋白激酶，它位于细 胞膜上，作为信号分子的受体，能够感受外界刺激，并通过磷酸 化和去磷酸化作用开启或关闭下游的靶蛋白，从而在植物生长发 育过程中起着重要的调节作用。拟南芥基因组在长期进化过程中， 演化出600多个类受体蛋白激酶(RLK)基因家族，但仅有几十个 RLK的功能得到鉴定。大多数类受体蛋白激酶的功能、信号传导 及配体识别等方面了解甚少，进一步研究其他RLK成员的生物学 功能意义重大。本人在对拟南芥类受体蛋白激酶突变体表型初步 分析中发现，拟南芥RLK80基因敲除突变体有种子变大表型。拟 南芥RLK80是LRRIII-RLK基因亚家族成员之一，编码一长751个 氨基酸的跨膜蛋白，其生物学功能目前尚未见报道。本研究从突 变体、组织表达模式、亚细胞定位、以及互作蛋白等方面进行分 析，对该基因的功能进行初步研究，获得了以下的研究结果： 1、首先，在植物的生长发育方面，rlkSO-1突变体植物组织 器官增大。与野生型(C01．0)比较，力拗一-的种子、子叶、花、 花粉和果荚都有增大，种子增大尤其明显。进一步对突变体种子 发育不同时期的透明观察发现，在突变体种子的早期球形胚阶段 就出现增大，心形胚、鱼雷胚阶段增大幅度进一步扩大。种子成 熟后对种子的百粒重测定表明，r2r脚。种子百粒重高达2．85mg， 而野生型种子百粒重仅为1．72mg，增幅达65％。另rlk80一-花粉 万方数据 的形态结构和活性发育都正常，但数量减少，且花粉较野生型大， 开花授粉后，突变体的角果也出现空座位。 2、通过亚细胞定位研究，RLK80基因定位于细胞膜上。本研 究构建并获得了RLK80带绿色荧光蛋白(GFP)标签的融合表达的 转基因植株阳性植株，在激光共聚焦显微镜下观察转基因植株的 根尖细胞，结果表明，RLK80基因定位在在植物的细胞膜上，同 时也构建了35S：：RLK80-GFP质粒并转化拟南芥原生质体，进一 步观察发现，该基因也在原生质体的细胞膜上表达。 3、在RLK80基因的组织表达研究中发现：该基因在植物的各 个组织中均有表达。半定量结果显示：RLK80在根、叶、花序、 角果中表达较高，在茎中的表达较少。且在不同组织中表达量是： 花序叶根角果。GUS报告基因介导的RLK80启动子显色表 明：该基因在拟南芥幼苗以及侧根发生处、柱头、萼片、花药、 气孔、胚珠等都有表达，且在雌配子中表达最高。 4、最后，本研究还通过酵母筛库获得4个与RLK80互作的候 证明了BIMI与RLK80可以相互作用。 综上所述，RLK80作为一个质膜定位的受体蛋白激酶，可能 通过与BIMI互作，传递信号，调控胚胎发育和种子的大小。 关键词：拟南芥，LRRII