肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源树突状细胞分化的影响.pdfVIP

第5卷 第2期 器官移植 Vo1．5 No．2 2014年 3月 O~ganTransplantation Mat．2014 · 实验 研 究 · 肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源 树突状细胞分化的影响 程锦涛 张英才 邓宜南 陆慧琼 张琪 杨扬 【摘要】 目的 研究肝癌相关成纤维细胞 (hCAF)在单核细胞 (Mo)来源树突状细胞 (DC) 分化过程中所起到的作用。方法 采用酶消化法从肝癌组织中分离培养获得人hCAF；采用密度梯度 离心法获取健康人外周血单个核细胞 (PBMC)，经密度梯度离心及磁珠分离法从健康人外周血浓缩 白细胞中获得 CD14Mo。hCAF—CD14Mo (1：10)和CD14Mo细胞在第 1日及第4Et均加入粒细胞一 巨噬细胞集落刺激因子 (20rig／m1)和白细胞介素4 (20ng／m1)，共诱导6d。两组细胞分为两份， 一 半加入脂多糖 (LPS)200rig／ml刺激 3d，另一半不加入 LPS作为对 照。最后细胞共分为4组： hCAF—Mo组、hCAF．Mo+LPS组、不成熟 DC (iDC)组及成熟 DC (mDC)组。采用倒置荧光显微镜 观察4组细胞的形态变化。各组细胞分为两部分，一部分细胞采用流式细胞术检测细胞表面分子 CD83、CD80、CD1a的表达情况，另一部分细胞分别与预染CFSE的淋巴细胞共培养5d，采用流式细 胞术检测T淋巴细胞增殖情况。结果 倒置显微镜结果显示在 hCAF干扰下Mo不能分化为 DC。 CD83、CD1a、CD80的表达在 iDC组分别为 (3．2±0．7)％、(61．7±8．4)％、(30．1±0．9)％，mDC 组分别为 (80．1±2．8)％、 (83．2±6．0)％、 (96．1±1．9)％，hCAF—Mo组分别为 (1．6±0．9)％、 (1．8±0．9)％、(16．0±3．2)％，hCAF．Mo+LPS组分别为 (9．0±1．2)％、(1．1±0．4)％、(58．4± 3．6)％。hCAF—Mo组与 iDC组的CD1a、CD80表达差异均有统计学意义 (均为P0．01)。iDC组的 CD83表达极低，因此hCAF—Mo组与 iDC组的CD83表达差异没有统计学意义(P0．05)。hCAF—Mo+ LPS组与mDC组的3种表型表达差异均有统计学意义 (均为P0．叭)。iDC组的T淋巴细胞增殖率 为 (3．3±0．9)％，mDC组为 (34．5-4-7．3)％，hCAF—Mo组为 (5．3±1．2)％，hCAF—Mo+LPS组为 (7．0±1．2)％。与iDC组相比，mDC组能有效地刺激T淋巴细胞增殖。hCAF-Mo组和hCAF-Mo+LPS组 刺激T淋巴细胞增殖的能力均较弱，与mDC组相比差异有统计学意义 (均为P0．01)。结论 hCAF 可明显抑制Mo分化成 DC，在肝癌的免疫逃逸过程中发挥重要的作用。 【关键词】 癌，肝细胞；肝癌相关成纤维细胞；树突状细胞；免疫逃逸 【中图分类号】R617 【文献标志码】A 【文章编号】1674-7445(2014)02—0011—06 Effects of hepatocellular carcinoma·associated fibroblasts OH differentiation of monocyte—delved dend~ticcells ChengJintao ，ZhangYingcai，DengYinan，LuHuiqiong，ZhangQi，YangYang． Liver TransplantationCenter，theThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，OrganTransplantationInstitute ofSunYat—senUniversity，OrganTransplantationResearchCenterofGuangdongProvince，Guangzhou510630， China Co~espondingauthor： Yang，Email：yysysu@163．eom 【Abstract】 Object