肝宝胶囊抗免疫性肝纤维化及其机制的研究.pdfVIP

122 中药药理与临床2014；30(1) 肝宝胶囊抗免疫性肝纤维化及其机制的研究 廖应养 ，石莹莹 ，石依坤 ，王利平。，肖 英 ，林 青 ，谭正怀 一 (云南中医学院 中药学院 ，昆明 650500；四川省中医药科学院，成都 610041) 摘 要 目的：探讨肝宝胶囊对免疫性肝纤维化小鼠的治疗作用及机制。方法：选用全雌Balb／e小鼠，随机分为对照组、模 型组、肝宝胶囊1．25、2．5、5g生药／kg、双环醇0．1g／kg，正常组小鼠尾静脉注射等体积无菌生理盐水溶液，其他各组尾静脉注射co— nA13mg／kg造模 ，每周一次，连续7周 ；造模的同时分别灌胃药物或0．5％CMC—Na，每天一次，连续7周。末次给药后24小时，取 肝脏、脾脏称湿重并计算其脏器指数，取血测定ALTI等生化指标，取肝脏测定其羟脯氨酸、胶原堆积、XI-SMA表达以及IL．10等细胞 因子水平。结果：小鼠在注射CortA13mg／kg7周后 ，其血清ALT、AST活性及TP、GLB、LN含量明显升高，A／G、ALB明显降低，肝脏 指数和脾脏指数显著增加，肝脏组织羟脯氨酸 (Hyp)、胶原堆积及XI—SMA表达明显增加，肝脏 IL-1O、IL一12．p70含量升高，而其 IL-13、 IL4的含量降低，与对照组比较差异有统计学意义。肝宝胶囊 1．25g生药／ 可显著降低ConA小鼠血清Au 活性及GLB水平，升 高其血清ALB水平及A／G比值，降低其肝脏羟脯氨酸含量及胶原堆积，显著降低小鼠肝脏组织的IL一10、IL一12p70、IL．13、TNF 、 MCP-1以及MIP含量。肝宝胶囊2．5g生药／kg可显著降低ConA小鼠血清A【活性、GLB和LN水平，升高其血清ALB水平及A／ G比值，降低其肝脏羟脯氨酸含量及胶原堆积 ，减少XI．SMA表达，显著降低小鼠肝脏组织的IL．12pT0、IL．13、TNFa、MCP．1以及 MIP 含量。肝宝胶囊5．0g生药／kg可显著降低ConA小鼠血清AL1’活性、GLB和LN水平，升高其血清ALB水平及A／G比值 ，降低其肝 脏羟脯氨酸含量及胶原堆积 ，减少XI·SMA表达，显著降低小鼠肝脏组织的 IL．12p70、IL．13、TNF仅、McP-1、MIP以及TGF~I含量。结 论：上述研究结果表明肝宝胶囊防治ConA诱导小鼠的肝纤维化可能与其能够显著抑制和肝纤维化各阶段有关的细胞因子表达有 关，而其抑制IL-10表达的作用，提示该药可能对病毒引起的慢性肝炎及肝纤维化有较好的疗效，其详细作用机理还有待进一步深 入研 究。 关键词 肝宝胶囊 ；免疫性肝纤维化；刀豆素A；细胞因子；小鼠 肝纤维化是肝脏受到持续慢性损伤时，细胞外基质(extra． 对湿度52％左右 ，照明12h明亮 ，12h黑暗。饲料为四川省中 eellularmatrix，ECM)可逆性沉积的创伤愈合过程”’，是各种 医药科学院实验动物中心提供的全价颗粒饲料。 慢性肝病向肝硬化发展所共有的病理改变和必经途径 ，目前无 1．3 试剂 刀豆素 A(ConA)：规格为 100mg／支，批号为 有效治疗药物。其中，免疫性因素在病毒性肝纤维化的进程 中 购 自Sigma公司。临用前用无菌生理盐水配制成所 起着非常重要的作用，肝宝胶囊由黄芩和五味子组成，本实验 需浓度的溶液备用。蛋 白酶抑制剂 ProteaseInhibitorCocktail 室前期研究显示该药物组合物对二甲基亚硝胺 (DMN)诱导的 SetⅢ，EDTA．Free。1ml，Cat．No．539134Rev．27．Feburary-2012 肝纤维化大鼠具有显著的防治作用，且对刀豆蛋 白A(ConA)诱 RFH，MerckKGaA，Darmstadt，Germany；三羟 甲基氨基 甲烷 导的急性免疫性肝损伤具有较好的保护作用(相关资料待发 (Tris)，分子量 121．14，Cat群 O60，1250ce，BeijingSolarbioSei— 表)。为评价肝宝胶囊预防免疫性肝纤维化的作用及其相关作 enceTechnologyCo．Ltd；脱氧胆酸钠 (Sodiumdeoxycholate)， 用机制，本实验选用多次注射 ConA诱导小鼠免疫性肝纤维化 A4