广西钦州湾红树林抗菌活性菌株Erwinia sp.5-8的筛选及发酵条件的优化.pdfVIP

第 33卷第 2期 海 洋 科 学 进 展 Vo1．33 NO．2 2015年 4月 ADVANCES IN MARINE SCIENCE April，2015 广西钦州湾红树林抗菌活性菌株 Erwinia sp．5—8的筛选及发酵条件的优化 孟令洋 ，姜 伟 ，张培玉 ，林学政 (1．青岛大学 环境科学与工程学院，山东 青岛 266071；2．国家海洋局 第一海洋研究所 ， 山东 青岛266061；3．国家海洋局 海洋生物活性物质重点实验室，山东 青岛266061) 摘 要：以金黄色葡萄球菌为指示菌，采用琼脂扩散法从国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室广西钦州湾红 树林微生物资源库 中筛选获得一株具有 明显抑菌效果的菌株 5-8，对该菌株进行 了分子鉴定与系统发育分析 。结 果表 明，此菌为欧文氏菌属(Erwinia)。通过单因子试验对其发酵条件进行 了优化，优化后发酵条件为 ：最佳氮源 为蛋 白胨，最佳碳源为葡萄糖，发酵培养基初始pH值为8．0，发酵温度为 25℃，盐度为 1．5，摇瓶装液量3O ，接种 量为 1 (#十 ： 睿| =1：100)。 关键词：红树林；欧文 氏菌；抗菌活性；系统发育分析；发酵条件优化 中图分类号：Q939．9 文献标识码 ：A 文章编号：1671—6647(2015)02—0270—09 随着陆源微生物资源的日益贫乏，海洋尤其是特殊生境的微生物资源已引起人们的高度重视 。处于 “海 洋—— 陆地”界面潮间带湿地生态系统的微生物资源因其所处生境的独特性 ，激起 了科学家对之进行研究的 浓厚兴趣 。世界各地红树林土壤 中新 的微生物物种不断被揭示 。如 Takenchi和 HatanoE、Lyimo等_l2]、 Arunasri等 J、Tamura和Sakanel4均相继从各地红树林土壤中分离出新的细菌。同时，由于红树林区的微 生物所处耐盐、厌氧等特殊生境，遗传及生理特性与其他生境中的微生物相 比具有特异性，具有产生新型活 性物质的潜力 ，是开发新药 的重要资源[5书]。目前 ，已经从红树林土壤微生物中筛选 出多种活性物质 。¨。 本研究 以金黄色葡萄球菌为指示菌 ，对分离 自广西钦州湾红树林根系泥样品中467株菌株进行了抑菌 活性筛选 ，筛选出一株对金黄色葡萄球菌有明显抑菌作用的活性菌株 5—8，对其进行了抗菌活性 的测定及其 系统发育分析 ，并对其发酵培养基进行了优化，研究了温度 、盐度 、初始 pH值、装液量和接种量对其生长和 抑菌活性的影响，为该活性菌株活性物质的开发提供了基础资料 。 1 材料和方法 1．1 指示菌和供试菌 供试菌 ：来 自国家海洋局海洋生物活性物质重点实验室微生物资源库 ，分离 白广西钦州湾红树林根系泥 的467株菌株。 指示菌 ：金黄色葡萄球菌(s￡口 z0∞cc aU?eUSACCC01331)，由实验室保存。 1．2 培养基 指示菌培养基 ：蛋白胨 10g，酵母粉 5g，氯化钠 1Og，琼脂 15g，用蒸馏水定容至 1L，1×10。Pa下湿热 收稿 日期 ：2014—06—13 资助项 目：海洋公益性行业科研专项经费项 目——海洋微生物小分子化合物资源库构建及药源活性物质的筛选应用(201005022—6) 作者简介 ：孟令洋(1990一)，男，山东泰安人，硕士研究生，主要从事海洋微生物方面研究．E—mail：menglingyang199O@163．corn *通讯作者 ：姜 伟 (1976一)，女 ，山东平度人 ，副研究员 ，博士 ，主要从事海洋生物方面研究．E—mail：jiangwei@rio．org．cn (王佳实 编辑) 2期 孟令洋 ，等：广西钦州湾红树林抗菌活性菌株 Erwiniasp．5-8的筛选及发酵条件的优化 271 灭菌 20rain。 测试菌培养基 (Zobell2216E)：蛋白胨 5g，酵母粉 1g，用过滤海水和 自来水按 2：1的体积比例配制 的